氟胺本質(zhì)上是不發(fā)熒光的，但會(huì)與脂族伯胺（包括肽和蛋白質(zhì)中的胺）迅速反應(yīng)，生成藍(lán)綠色熒光衍生物。Amplite™熒光胺蛋白測定試劑盒提供了一種簡單的定量溶液中蛋白質(zhì)濃度的方法。該Amplite™熒光胺蛋白測定試劑盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，無需任何分離步驟即可輕松實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。該測定可以在30分鐘內(nèi)完成。使用Amplite™熒光胺蛋白測定試劑盒，可以檢測到低至3 ug / mL的BSA。

1. 準(zhǔn)備BSA標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品（75 µL） 
2. 加入熒光胺工作溶液（25 µL）
3. 在室溫下孵育5-30分鐘
4. 在Ex / Em = 380/470 nm時(shí)讀取熒光強(qiáng)度

重要說明
開始實(shí)驗(yàn)之前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊性噭┖薪M件。

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

為了方便起見，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)

通過以1：2的系列稀釋度將適量的BSA標(biāo)準(zhǔn)品1 mg / mL（組分C）稀釋到PBS中以獲得BSA標(biāo)準(zhǔn)品（BS7-BS1）的系列稀釋液。

準(zhǔn)備工作溶液

將全部內(nèi)容的DMSO（組分B）添加到瓶中的熒光胺（組分A）中，并充分混合。注意： 2.5 mL的熒光胺工作溶液足以裝滿1個(gè)板。

程序

表1. 黑色96孔微孔板中BSA標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局。BS = BSA標(biāo)準(zhǔn)品（BS1-BS7，1.563至100 µg / mL），BL =空白對(duì)照，TS =測試樣品。

表2. 每個(gè)孔的試劑組成。

1. 根據(jù)表1和表2提供的布局，準(zhǔn)備BSA標(biāo)準(zhǔn)品（BS），空白對(duì)照（BL）和測試樣品（TS）。對(duì)于384孔板，每孔使用30 µL試劑，而不是75 µL。
    
2. 在BSA標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測試樣品的每個(gè)孔中添加25 µL熒光胺工作溶液，以使總測定體積為100 µL /孔。對(duì)于384孔板，請(qǐng)向每個(gè)孔中添加10 µL熒光胺工作溶液，總體積為40 µL /孔。
    
3. 在避光條件下，于室溫下孵育反應(yīng)5至30分鐘。
    
4. 使用熒光板讀數(shù)器在Ex / Em = 380/470 nm處監(jiān)控?zé)晒獾脑黾印?/li>

數(shù)據(jù)分析

100010010- Dose-responseData legendGenerated with Quest Graph™BSA (ug/mL)RFUHover mouse to interact

從空白標(biāo)準(zhǔn)孔獲得的讀數(shù)（RFU）用作陰性對(duì)照。從其他標(biāo)準(zhǔn)的讀數(shù)中減去該值即可得到基線校正值。然后，繪制標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù)，以獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線和方程式。該公式可用于計(jì)算BSA樣本。我們建議您使用在線線性回歸計(jì)算器，