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高爾基體是大多數(shù)真核細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)囊泡和折疊膜的復(fù)合體，參與分泌和細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸。它修飾內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）中內(nèi)置的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，并準(zhǔn)備將其輸出到細(xì)胞外。它在脂質(zhì)在整個細(xì)胞中的運(yùn)輸和溶酶體的形成中也起著重要作用。該Cell Navigator™NBD神經(jīng)酰胺高爾基染色試劑盒提供了一種簡便，快速的方法，可以選擇性地對活細(xì)胞或醛固定細(xì)胞中的高爾基染色。C6 NBD神經(jīng)酰胺與牛血清白蛋白（C6-NBD-Ceramide-BSA）形成復(fù)合物。高爾基體通過形成相應(yīng)的熒光代謝產(chǎn)物而被染色。
| 熒光顯微鏡 | |
| 激發(fā) | 488納米 |
| 發(fā)射 | 525納米 |
| 推薦板 | 黑墻/透明底 |
| 儀器規(guī)格 | FITC過濾器組 |
| 成分A：C6 NBD神經(jīng)酰胺 | 1個小瓶 |
| 組分B：染色緩沖液 | 1瓶（25毫升） |
| 成分C：DMSO | 1小瓶（200 µL） |
| 成分D：赫斯特33342 | 1小瓶（50 µL） |
- 根據(jù)需要處理細(xì)胞
- 加入C6 NBD神經(jīng)酰胺工作溶液并在室溫或37°C下孵育15?30分鐘
- 更換染色緩沖液，然后在室溫或37°C下孵育15?30分鐘
- 使用FITC濾鏡套件在顯微鏡下觀察
- 可選：用4％甲醛固定細(xì)胞
重要說明
開始實驗之前，請在室溫下解凍每種試劑盒成分之一。
儲備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. C6 NBD神經(jīng)酰胺原液（100X）：
將100 µL DMSO（組分C）加入小瓶C6 NBD神經(jīng)酰胺（組分A）中并充分混合。注：將未使用的C6 NBD神經(jīng)酰胺原液在-20 Ø在單次使用等份℃。避免凍融循環(huán)。
準(zhǔn)備工作溶液
1. C6 NBD神經(jīng)酰胺工作溶液：
將10 µL NBD神經(jīng)酰胺儲備溶液（100X）添加到990 µL染色緩沖液（組分B）中，制成NBD神經(jīng)酰胺工作溶液。
可選：將10 µL Hoechst 33342（組分D）添加到1mL NBD神經(jīng)酰胺工作溶液中以進(jìn)行核染色。在帶有DAPI濾光片組的熒光顯微鏡下觀察
程序
- 接種并根據(jù)需要處理細(xì)胞。
- 直接在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入100µL C6 NBD神經(jīng)酰胺工作溶液。
- 在室溫或37°C下孵育15?30分鐘。
- 除去C6 NBD神經(jīng)酰胺工作溶液，并用每孔100 µL的染色緩沖液（組分B）更換。
- 在室溫或37°C下孵育10?15分鐘。
- 在裝有FITC濾光片的熒光顯微鏡下觀察。
可選的：
- 從步驟4中除去染色緩沖液，并向每個孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4％甲醛固定緩沖液（未提供）。注意：對于非貼壁細(xì)胞，添加所需量（例如2X10 6細(xì)胞/ mL）的4％甲醛固定液。
- 在室溫下將平板孵育20至30分鐘。去除固定劑。用PBS洗滌細(xì)胞2-3次，并用100 µL /孔的染色緩沖液（組分B）替換。
Cell Navigator™NBD神經(jīng)酰胺高爾基染色試劑盒*綠色熒光* Cell Navigator™ NBD Ceramide Golgi Staining Kit *Green Fluorescence* 100 Tests Live或Dead™細(xì)胞活力檢測試劑盒*綠色/紅色雙熒光* Live or Dead™ Cell Viability Assay Kit *Green/Red Dual Fluorescence* 1000 Tests Cell Meter™比色法CPK-8細(xì)胞定量試劑盒 Cell Meter™ Colorimetric CPK-8 Cell Quantification Kit 1000 Tests Cell Meter™比色法CPK-8細(xì)胞定量試劑盒 Cell Meter™ Colorimetric CPK-8 Cell Quantification Kit 5000 Tests Cell Meter™比色細(xì)胞細(xì)胞毒性檢測試劑盒 Cell Meter™ Colorimetric Cell Cytotoxicity Assay Kit 5000 Tests Cell Meter™比色法細(xì)胞毒性檢測試劑盒 Cell Meter™ Colorimetric Cell Cytotoxicity Assay Kit 1 kit Cell Meter™熒光法細(xì)胞毒性檢測試劑盒 Cell Meter™ Fluorimetric Cell Cytotoxicity Assay Kit 1 kit Cell Meter™熒光細(xì)胞細(xì)胞毒性檢測試劑盒 Cell Meter™ Fluorimetric Cell Cytotoxicity Assay Kit 5000 Tests
