會(huì)員.png)
6
腫瘤細(xì)胞對(duì)細(xì)胞毒性藥物的耐藥性被認(rèn)為是成功化療的主要障礙之一。某些腫瘤zui初是有抵抗力的，對(duì)細(xì)胞抑制藥物的治療從未反應(yīng)。其他人zui初反應(yīng)良好，但zui終長(zhǎng)大后變得抵抗。這種現(xiàn)象可能是由于所施用的抗腫瘤劑引起的基因突變所致，或者可能代表了惡性腫瘤中先前存在的耐藥細(xì)胞群的選擇。多種藥物耐藥性（MDR）是導(dǎo)致多種形式化療失敗的主要因素。在過(guò)去的幾年中，對(duì)化學(xué)療法的抗性與至少兩個(gè)ATP依賴性藥物外排泵的過(guò)表達(dá)相關(guān)聯(lián)已被廣泛接受。這些細(xì)胞膜蛋白稱為P-糖蛋白（Pgp，MDR1），和多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRP1）是ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族的成員。我們的測(cè)定試劑盒使用熒光MDR指示劑來(lái)測(cè)定這兩種MDR泵的活性。該疏水性熒光染料分子迅速穿透細(xì)胞膜并被困在細(xì)胞中。短暫孵育后，細(xì)胞內(nèi)游離染料濃度會(huì)顯著增加。在表達(dá)MDR1和/或MRP1的細(xì)胞中，這種染料被MDR轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白擠出，從而降低了細(xì)胞的熒光強(qiáng)度。但是，當(dāng)其擠出被干擾MDR1和/或MRP1泵浦活性的物質(zhì)阻止時(shí)，其細(xì)胞熒光強(qiáng)度會(huì)顯著增加。我們的MDR分析試劑盒可通過(guò)優(yōu)化的分析方法提供所有基本成分。該測(cè)定可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，并易于適應(yīng)自動(dòng)化。該測(cè)定試劑盒非常適合高通量篩選MDR泵抑制劑或鑒定具有高水平MDR泵活性的細(xì)胞
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| 激發(fā) | 490納米 |
| 發(fā)射 | 525納米 |
| 隔斷 | 515納米 |
| 推薦板 | 黑墻/透明底 |
| 儀器規(guī)格 | 底讀模式 |
| 組件A：MDR傳感器 | 1小瓶，凍干 |
| 成分B：DMSO | 1小瓶（100 µL） |
| 組分C：測(cè)定緩沖液 | 1瓶（10毫升） |
- 準(zhǔn)備細(xì)胞
- 添加MDR抑制劑或化合物
- 添加MDR染料加載溶液（對(duì)于96孔板為100 µL /孔，對(duì)于384孔板為25 µL /孔）
- 在室溫下孵育1小時(shí)
- 使用底部讀取模式監(jiān)控Ex / Em = 490/525 nm時(shí)的熒光強(qiáng)度
重要說(shuō)明
使用前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊刑准M件。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
MDR傳感器儲(chǔ)備溶液：
將20 µL（目錄號(hào)36340-1板）或200 µL（目錄號(hào)36341-10板）的DMSO（組分B）加入MDR傳感器（組分A）中，并充分混合。注意：20 µL MDR傳感器原液足以裝滿一塊板。如果未密封的MDR傳感器原液可以分裝，并在< -20 o C下保存1個(gè)月。避光，并避免反復(fù)凍融和潮濕。
準(zhǔn)備工作溶液
MDR染料加載溶液：
將20 µL MDR傳感器儲(chǔ)備溶液添加到10 mL分析緩沖液（組分C）中，并充分混合。注意： MDR染料加載溶液足以裝滿一塊印版，并且在室溫下至少可穩(wěn)定2小時(shí)。
程序
- 通過(guò)將10 µL的10X（96孔板）或5 µL的5X（384孔板）化合物加入化合物緩沖液（如PBS或HHBS）中來(lái)處理細(xì)胞。對(duì)于空白孔（沒(méi)有細(xì)胞的培養(yǎng)基），添加相應(yīng)量的化合物緩沖液。 注意：添加化合物之前不必洗滌細(xì)胞。但是，如果測(cè)試的化合物對(duì)血清敏感，則可以在添加化合物之前將生長(zhǎng)培養(yǎng)基和血清因子吸掉。抽吸后，向孔中添加相同體積的HHBS（例如，對(duì)于96孔板為90 µL，對(duì)于384孔板為20 µL）?；蛘?，細(xì)胞可以在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。
- 在室溫下孵育或在37細(xì)胞板ø C，5％CO 2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至少15分鐘或期望的時(shí)間段。
- 加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的MDR染料加載溶液。
- 在避光條件下，于室溫下將染料裝載板孵育1小時(shí)。 注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所用的單個(gè)細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。（我們?cè)诜跤龝r(shí)間少于4小時(shí)的情況下獲得了*結(jié)果。） 注意：加載后請(qǐng)勿洗滌細(xì)胞。 注意：對(duì)于非貼壁細(xì)胞，建議孵育后以800 rpm離心細(xì)胞板2分鐘，然后制動(dòng)。
- 使用底部讀取模式監(jiān)控Ex / Em = 490/525 nm的熒光強(qiáng)度。
36340 Screen Quest™熒光法多藥物抗性MDR檢測(cè)試劑盒 *1板* Screen Quest™ Fluorimetric MDR Assay Kit *1 Plate* 100 Tests 36341 Screen Quest™熒光法多藥物抗性MDR檢測(cè)試劑盒 *10板* Screen Quest™ Fluorimetric MDR Assay Kit *10 Plates* 1 kit 36350 Screen Quest™比色法氯離子通道檢測(cè)試劑盒 Screen Quest™ Colorimetric Chloride Channel Assay Kit 10 Plates 36351 Screen Quest™比色法氯離子通道檢測(cè)試劑盒 Screen Quest™ Colorimetric Chloride Channel Assay Kit 100 Plates
