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葡萄糖是一種單糖，是生物學(xué)中zui重要的碳水化合物。它是細(xì)胞生長(zhǎng)的能量和代謝中間體。葡萄糖是光合作用的主要產(chǎn)物之一，在原核生物和真核生物中都開(kāi)始細(xì)胞呼吸。葡萄糖水平是許多代謝紊亂的關(guān)鍵診斷參數(shù)。該葡萄糖測(cè)定試劑盒提供了一種快速而靈敏的方法來(lái)測(cè)量各種生物樣品（例如血清，血漿，體液，食物，生長(zhǎng)培養(yǎng)基等）中的葡萄糖。該試劑盒使用了我們的Amplite™Red底物，使該試劑盒可通過(guò)熒光或比色讀數(shù)雙重記錄。該試劑盒可提供所有必需成分，并具有優(yōu)化的測(cè)定方案。該測(cè)定是可靠的，并且可以很容易地應(yīng)用于需要測(cè)量葡萄糖的多種應(yīng)用中的高通量分析。例如，該測(cè)定法可能適合于監(jiān)測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)過(guò)程中發(fā)酵和葡萄糖進(jìn)料期間的葡萄糖水平。它也可以用于監(jiān)測(cè)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| 激發(fā) | 540納米 |
| 發(fā)射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
| 成分A：Amplite™紅色（光敏） | 1個(gè)小瓶 |
| 組分B：測(cè)定緩沖液 | 1瓶（50毫升） |
| 成分C：辣根過(guò)氧化物酶（HRP） | 1小瓶（10單位） |
| 成分D：葡萄糖氧化酶 | 1瓶（100單位） |
| 成分E：DMSO | 1小瓶（200 µL） |
| 成分F：葡萄糖 | 1小瓶（144毫克） |
準(zhǔn)備并添加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品和/或測(cè)試樣品（50 µL）
準(zhǔn)備并添加葡萄糖測(cè)定工作溶液（50 µL）
在37°C孵育10-30分鐘
監(jiān)測(cè)Ex / Em = 540/590 nm時(shí)的熒光強(qiáng)度
重要說(shuō)明
開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊性噭┖薪M件。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. Amplite™Red儲(chǔ)備液（250X）：
將100 µL DMSO（組分E）添加到Amplite™Red底物（組分A）的小瓶中。儲(chǔ)備溶液應(yīng)及時(shí)使用。應(yīng)將所有剩余的溶液等分，并在-20 o C重新冷凍。注意：避免重復(fù)凍融循環(huán)。注意：在硫醇（例如二硫蘇糖醇（DTT）存在下，Amplite™Red底物不穩(wěn)定。反應(yīng)中DTT的終濃度應(yīng)不高于10 µM。Amplite™Red底物在高pH（> 8.5）下也不穩(wěn)定。因此，反應(yīng)應(yīng)在pH 7-8下進(jìn)行。建議使用提供的測(cè)定緩沖液（pH 7.4）。
2.辣根過(guò)氧化物酶（HRP）儲(chǔ)備溶液（10 U / mL）：
將1毫升測(cè)定緩沖液（組分B）加入小瓶辣根過(guò)氧化物酶（組分C）。注意：未使用的HRP解決方案應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并保存在-20 o C下。
3.葡萄糖氧化酶溶液（100 U / mL）：
將1 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）添加到樣品瓶中的葡萄糖氧化酶（組分D）中。注意：未使用的葡萄糖氧化酶溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在-20 o C下儲(chǔ)存 。
4.葡萄糖儲(chǔ)備溶液（800mM）：
將1 mL測(cè)定緩沖液（組分B）添加到葡萄糖瓶（組分F）中。注意：未使用的葡萄糖溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在-20 o C下儲(chǔ)存 。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見(jiàn)，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)
通過(guò)將適量的800 mM葡萄糖儲(chǔ)備溶液稀釋到測(cè)定緩沖液（組分B）中以產(chǎn)生30 µM的葡萄糖濃度來(lái)制備葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。然后在測(cè)定緩沖液（組分B）中進(jìn)行1：3系列稀釋，以得到大約10、3、1、0.3、0.1和0.03 µM系列稀釋的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。包括非葡萄糖緩沖液對(duì)照作為空白對(duì)照。
準(zhǔn)備工作溶液
表1. 一塊透明的底部96孔微孔板（2X）的測(cè)定工作溶液
組件 | 體積 |
Amplite™紅色儲(chǔ)備液（250x） | 20微升 |
HRP儲(chǔ)備溶液（10 U / mL） | 100微升 |
葡萄糖氧化酶溶液（100 U / mL） | 100微升 |
分析緩沖液 | 4.78毫升 |
總?cè)莘e | 5毫升 |
程序
表2. 黑色96孔微孔板中葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品的布局。GS =葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（GS1-GS7）; BL =空白對(duì)照；TS =測(cè)試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| GS1 | GS1 | ... | ... |
| GS2 | GS2 | ... | ... |
| GS3 | GS3 | ||
| GS4 | GS4 | ||
| GS5 | GS5 | ||
| GS6 | GS6 | ||
| GS7 | GS7 |
表3. 每個(gè)孔的試劑組成
| 好 | 體積 | 試劑 |
| GS1-GS7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋（0.03至30µM） |
| BL | 50微升 | 分析緩沖液（化合物B） |
| TS | 50微升 | 測(cè)試樣本 |
注意：由于Amplite™紅色底物（變成非熒光產(chǎn)品）的過(guò)氧化，高濃度的葡萄糖（例如，測(cè)試樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的100 µM）可能導(dǎo)致熒光信號(hào)降低。
葡萄糖測(cè)定
如表2和3所述，將葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品和含葡萄糖的測(cè)試樣品添加到96孔固體黑色微孔板中。
在葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中加入50 µL葡萄糖測(cè)定工作溶液（表2），使總葡萄糖測(cè)定體積為100 µL /孔。 注意： 對(duì)于384孔板，將25 µL樣品和25 µL測(cè)定反應(yīng)混合物加到每個(gè)孔中。
避光保存，在37 o C下將反應(yīng)孵育10至30分鐘 。
使用熒光板讀數(shù)器在Ex / Em = 530-570 nm / 590-600 nm（*Ex / Em = 540/590 nm）處監(jiān)控?zé)晒鈴?qiáng)度。
40004 Amplite™比色法葡萄糖定量試劑盒 Amplite™ Colorimetric Glucose Quantitation Kit 500 Tests 40005 Amplite™熒光法葡萄糖定量試劑盒 Amplite™ Fluorimetric Glucose Quantitation Kit 500 Tests 40006 Amplite™danguchun定量試劑盒 Amplite™ Cholesterol Quantitation Kit 1 kit 40007 Amplite™danjian定量試劑盒 Amplite™ Choline Quantitation Kit 1 kit
