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ADP-核糖-pNP是用于評(píng)估聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）酶活性的比色底物。在405 nm處測(cè)定釋放的對(duì)硝基benfen的吸光度，并使用校準(zhǔn)曲線的斜率將吸光度轉(zhuǎn)換為生成的產(chǎn)物的摩爾數(shù)。以ADP-核糖-pNP作為比色底物，確定PARP-1具有zui大的Km和Vmax值（分別為151 uM和1.30 nmolmin-1mg-1），然后是tankyrase-1（82 uM和18 pmolmin-1mg-）。 1）和VPARP（分別為46 uM和2 pmolmin-1mg-1）。此比色底物可用于確定PARP-1，tankyrase-1和VPARP的動(dòng)力學(xué)參數(shù)，并篩選PARP-1，tankyrase-1和VPARP的小分子抑制劑。與標(biāo)準(zhǔn)的不連續(xù)PARP分析相比，基于ADP-核糖-pNP的連續(xù)分析具有明顯的優(yōu)勢(shì)，
| 吸光度酶標(biāo)儀 | |
| 吸光度 | 405納米 |
| 推薦板 | 純白色 |
以下建議的步驟可適用于測(cè)量PARP-1，tankyrase-1和VPARP活性及其抑制劑。對(duì)于每個(gè)測(cè)試，必須通過實(shí)驗(yàn)確定*條件。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. ADP-核糖-pNP儲(chǔ)備溶液：
在H 2 O中制成5-10 mM儲(chǔ)備溶液。注意：儲(chǔ)備溶液應(yīng)立即使用。
準(zhǔn)備工作溶液
ADP-核糖-pNP工作溶液：
用測(cè)定緩沖液（50mM Tris，10mM MgCl 2，pH 8.0）稀釋儲(chǔ)備液，制備0.25 mM測(cè)定溶液。
程序
將0.01 mL /孔的樣品溶液添加到0.09 mL /孔的測(cè)定溶液中，以在96孔透明板上zui終體積為0.1 mL。
使用酶標(biāo)儀在405 nm處監(jiān)測(cè)板。
普通儲(chǔ)備溶液的制備
表1.將特定質(zhì)量的ADP-核糖-pNP重構(gòu)為給定濃度所需的水量。請(qǐng)注意，該體積僅用于制備儲(chǔ)備溶液。有關(guān)適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)/生理緩沖液，請(qǐng)參閱樣本實(shí)驗(yàn)方案。
| 0.1毫克 | 0.5毫克 | 1毫克 | 5毫克 | 10毫克 | |
| 1毫米 | 138.051微升 | 690.255微升 | 1.381毫升 | 6.903毫升 | 13.805毫升 |
| 5毫米 | 27.61微升 | 138.051微升 | 276.102微升 | 1.381毫升 | 2.761毫升 |
| 10毫米 | 13.805微升 | 69.025微升 | 138.051微升 | 690.255微升 | 1.381毫升 |
糖度計(jì)算器
輸入任何兩個(gè)值（質(zhì)量，體積，濃度）以計(jì)算第三個(gè)值。
| 11700 | PARP酶顯色底物ADP-ribose-pNP | ADP-ribose-pNP | 1 mg |
| 11705 | 葡糖基轉(zhuǎn)稱酶與梭菌酶熒光底物UDP-Gic-FITC | Glucose-UDP-Fluorescein Conjugate | 100 ug |
| 11706 | 葡糖基轉(zhuǎn)稱酶與梭菌酶熒光底物UDP-Gic-PEG-FITC | Glucose-UDP-(PEG)6-Fluorescein Conjugate | 100 ug |
| 11950 | Amplite™比色法堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒 *黃色* | Amplite™ Colorimetric Alkaline Phosphatase Assay Kit *Yellow Color* | 1 kit |
| 11952 | Amplite™熒光法堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒 *藍(lán)色熒光* | Amplite™ Fluorimetric Alkaline Phosphatase Assay Kit *Blue Fluorescence* | 1 kit |
| 11953 | Amplite™熒光法堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒 *綠色熒光* | Amplite™ Fluorimetric Alkaline Phosphatase Assay Kit *Green Fluorescence* | 1 kit |
