鬼筆環(huán)肽-加州紅標(biāo)記探針會(huì)選擇性地結(jié)合F-肌動(dòng)蛋白。以納摩爾濃度使用，鬼筆環(huán)肽衍生物是方便的探針，用于標(biāo)記，鑒定和定量甲醛固定和透化組織切片中的F-肌動(dòng)蛋白，細(xì)胞培養(yǎng)物或無(wú)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。肌動(dòng)蛋白是一種球狀的，大約42kDa的蛋白質(zhì)，幾乎存在于所有真核細(xì)胞中。 它也是最高度保守的蛋白質(zhì)之一，與藻類和人類不同的物種相差不超過20％。 肌動(dòng)蛋白是細(xì)胞中兩種細(xì)絲的單體亞基：微絲，細(xì)胞骨架的三個(gè)主要組分之一，以及微絲，是肌細(xì)胞中收縮裝置的一部分。 因此，肌動(dòng)蛋白參與許多重要的細(xì)胞過程，包括肌肉收縮，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，細(xì)胞分裂和胞質(zhì)分裂，囊泡和細(xì)胞器運(yùn)動(dòng)，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，以及細(xì)胞連接和細(xì)胞形狀的建立和維持。

本品以1000×儲(chǔ)存液形式（溶于DMSO）提供。按照100µl/孔（96孔板），總共可做300T。

操作步驟

1.制備1X鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液：加入1μL1000X鬼筆環(huán)肽綴合物DMSO溶液至1 mL含1％BSA的PBS。

注意1：鬼筆環(huán)肽綴合物的未使用的1000X DMSO儲(chǔ)備溶液應(yīng)等分并儲(chǔ)存在-20℃，避光。

注意2：不同的細(xì)胞類型可能染色不同。 應(yīng)相應(yīng)地制備鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液的濃度。

2.染色細(xì)胞：

2.1執(zhí)行甲醛固定。 在室溫下將含3.0-4.0％甲醛的細(xì)胞在PBS中孵育10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因?yàn)榧状紩?huì)在固定過程中破壞肌動(dòng)蛋白。 優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

2.2用PBS沖洗固定的細(xì)胞2-3次。

2.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細(xì)胞3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細(xì)胞2-3次。

2.4將100μL/孔（96孔板）鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液加入固定的細(xì)胞，并在室溫下染色細(xì)胞20至90分鐘。

2.5在加上蓋玻片之前，用PBS輕輕沖洗細(xì)胞2至3次以除去過量的鬼筆環(huán)肽綴合物，然后在顯微鏡下進(jìn)行，密封和成像。

注意事項(xiàng)

1）DMSO有毒，使用時(shí)請(qǐng)小心操作。

2）了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

Note:   鬼筆環(huán)肽具有毒性，需小心操作（對(duì)人，其半數(shù)致死劑量為2mg/Kg）。 

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