重組花生過敏原Ara h1, UniProt: P43237,氨基酸26-216。
主機(jī)的兔子
單克隆多克隆
蛋白G純化血清
格式的液體
量50µg
-20°C保存凍干/重組;一旦重組,使公平,以避免重復(fù)凍融循環(huán),請(qǐng)記住,在打開之前,旋轉(zhuǎn)管短暫,以避免任何損失,凍干材料粘附在瓶蓋或管的兩側(cè)
間接ELISA (i-ELISA), Western blot (WB)
推薦稀釋倍數(shù)1:32萬(i-ELISA), 1:1000 (WB)
Western blot檢測抗花生Ara h1,克隆17個(gè)抗體
從脫脂輕烤花生面粉中新鮮提取30 (30)g總蛋白,加入硼酸鹽緩沖鹽水(BBS)溶液(100 mM H3BO4, 25 mM Na2B4O7, 75 mM NaCl, pH 8.6),在4℃下不斷攪拌1小時(shí)。樣品用含有50 mM DTT的NuPAGE™LDS樣品緩沖液按1:4 (v/v)的比例變性,并在70°C孵育5分鐘。樣品在Novex™10-20% Tricine蛋白凝膠上分離,使用iBlot干轉(zhuǎn)移系統(tǒng)印跡7分鐘至硝化纖維素。用5%牛奶和0.1%吐溫-20 (PBST)的磷酸鹽緩沖鹽水(pH 7.4)阻斷印跡,攪拌1小時(shí)/RT。用PBS-T攪拌,稀釋1:1000,攪拌1小時(shí)/RT。倒出抗體溶液,簡單沖洗印跡,然后用10mL在PBST中沖洗3次,攪拌5分鐘。印跡與Donkey anti-Rabbit IRDye 680RD二抗(LI-COR,內(nèi)布拉斯加州,美國)孵育,pbs稀釋至1:10萬,攪拌1小時(shí)/RT。污漬被如上所述清洗,在LI-COR Odyssey上掃描,并使用680nM通