大腸桿菌K12菌株背景，DH10B菌株的衍生菌株，核基因中具有l(wèi)ianmeisu抗性基因(StrR)；可轉(zhuǎn)化大質(zhì)粒和BACs；DNA重組缺陷(recA1)和內(nèi)切酶 I缺陷(endA1)的特點有利于DNA克隆的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提??；對T1噬菌體有抵抗能力（fhuA2）；無需添加IPTG，只加X-gal即可檢測beta半乳糖苷酶活性，用于藍(lán)白斑篩選。

NEB 10-beta電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。該菌株為DH10B衍生株，屬大腸桿菌K12菌株，特別適用于BAC，Cosmid等大質(zhì)粒骨架的文庫構(gòu)建和大質(zhì)?？寺』驍U增。DNA重組缺陷(recA1)和I型內(nèi)切酶缺陷(endA1)的特點有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA的提取。該菌株具有抗T1噬菌體感染的特點，還可用于藍(lán)/白斑篩選實驗，檢測β-半乳糖苷酶的活性時，無需添加IPTG，只加X-gal即可。NEB 10-beta電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1X10cfu/μg DNA。基因型為:araD139△(ara,leu)7697 fhuA lacX74 galK16 galE15 mcrA80d(lacZM15)recAl relAl endAlnupG rpsL rph spoT1△(mrrhsdRMS-mcrBC)

操作方法:

1.電極間距為 0.1cm 的電轉(zhuǎn)杯(Gene Pulser/MicroPulser" electroporation cuvettes)插入碎冰中，壓實冰面,冰中靜置5分鐘,使電轉(zhuǎn)杯充分降溫。(電轉(zhuǎn)杯重復(fù)使用方法:每次用完后,用大量的自來水沖洗干凈去掉菌液和DNA,用蒸餾水洗3遍,將其泡在75%乙醇中30分鐘,取出杯子,瀝干液體,放在超凈臺中,使乙醇充分揮發(fā),蓋上蓋子放干燥地方備用)。2.取-70℃保存的感受態(tài)細(xì)胞插入冰中,待細(xì)胞剛化凍后,加入質(zhì)粒DNA或連接產(chǎn)物(洗脫或溶解質(zhì)粒的溶液中離子不能太高,或用雙蒸水稀釋,對照pUC19可以用無菌水稀釋到10pg/μl),用手指boda管底輕輕混勻,立即插入冰中,在超凈臺中用無菌吸頭將細(xì)胞/DNA混合物快速轉(zhuǎn)移到電擊杯中,避免產(chǎn)生氣泡,確保細(xì)胞沉到杯底,蓋上杯蓋,空管保留待用。3.啟動電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置電擊參數(shù):2.4kV,200Ω,25μF(BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser)。用紙巾擦掉電轉(zhuǎn)杯外部的水分,將電轉(zhuǎn)杯放入電轉(zhuǎn)槽中進(jìn)行電擊。完成后,將電轉(zhuǎn)杯插入冰中,加入950μl無抗生素的 SOC 或LB培養(yǎng)基,并將液體轉(zhuǎn)移到原來保留的感受態(tài)空管中,37C,150-250rpm 振蕩培養(yǎng)1小時。4.取 100-200μl左右的菌液或稀釋后的菌液,涂布于含相應(yīng)抗生素的LB平板上,倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)12-18小時。