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ELISA與常規(guī)免疫實(shí)驗(yàn)對(duì)比

時(shí)間:2022-11-9閱讀:175
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ELISA,酶聯(lián)免疫法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)是將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測(cè)體液中微量物質(zhì)的固相免疫測(cè)定方法,利用抗原抗體的特異性反應(yīng),對(duì)樣本中可溶性目的產(chǎn)物進(jìn)行定量檢測(cè)。


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ELISA 與常規(guī)免疫實(shí)驗(yàn)對(duì)比

ELISA樣本制備簡(jiǎn)單;靈敏度高;特異性強(qiáng);重復(fù)性好;操作簡(jiǎn)單;檢測(cè)儀器易獲得。

ELISA(酶聯(lián)免疫吸附)IHC(免疫組化)Western bolt (蛋白質(zhì)印跡法)
定性定性定性(一般不用)
多用于定量分析半定量定量
非定位定位(優(yōu)勢(shì))半定位
靈敏度高靈敏度中高靈敏度高
血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液組織、細(xì)胞切片組織/細(xì)胞勻漿
分泌蛋白/細(xì)胞因子胞內(nèi)蛋白/膜蛋白對(duì)指標(biāo)定位沒有要求

常見ELISA種類

一、直接ELISA

原理:將抗原與固相載體連接,洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加酶標(biāo)抗體進(jìn)行孵育。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。CHED I洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。加底物反應(yīng)。直接法主要用于測(cè)定抗原。


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二、間接法ELISA

原理:將抗原與固相載體相連結(jié),形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加入特異性一抗與固相抗原相結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,加酶標(biāo)二抗。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)二抗結(jié)合,從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后,加底物顯色。


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三、雙抗夾心法ELISA

原理:雙抗體夾心法適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子,但不適用于小分子抗原。將特異性抗體(捕獲抗體)與固相載體連接,形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。加入待檢樣品,保溫孵育。樣品中的特異性抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。加酶標(biāo)抗體(檢測(cè)抗體)保溫孵育。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。CHEDI洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。加底物反應(yīng)。

雙抗原夾心法測(cè)抗體的反應(yīng)模式與測(cè)抗原相似,用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物,以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。



四、競(jìng)爭(zhēng)法ELISA

原理:競(jìng)爭(zhēng)法ELISA最為復(fù)雜,通常用于檢測(cè)小分子如半抗原、激素、藥物等。樣品中待檢游離抗原與固定于固相載體上的抗原一起競(jìng)爭(zhēng)相同的有XIANLIANG抗體,當(dāng)樣品中的游離抗原越多,就可結(jié)合越多的抗體,而固相抗原只能結(jié)合較少的抗體。反之亦然。經(jīng)洗滌去除樣品中的抗原與抗體的結(jié)合物,只留下固相抗原與抗體的結(jié)合物。顯示經(jīng)計(jì)算可得樣品中抗原的含量。競(jìng)爭(zhēng)法可根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置直接法、間接法或夾心法形式。


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不同 ELISA 檢測(cè)方法比較

方法應(yīng)用范圍優(yōu)勢(shì)缺點(diǎn)備注
雙抗體夾心法檢測(cè)抗原常用的方法,用于檢測(cè)大分子靈敏度高、特異性強(qiáng)、抗原無需事先純化檢測(cè)物需要擁有兩個(gè)以上不同的抗原表位或多個(gè)相同的重復(fù)表位不能用于小分子檢測(cè)
直接法檢測(cè)抗體最常見的方法,對(duì)于病原體抗體檢測(cè)和診斷操作簡(jiǎn)便、無需二抗、避免交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中的一抗需要直接用酶標(biāo)記,成本相對(duì)較高。一抗特異性非常重要
間接法同上二抗可以加強(qiáng)信號(hào)交叉反映幾率高抗原純度重要
競(jìng)爭(zhēng)法適用于檢測(cè)特異性抗體、抗原中有不易去除的干擾物高效、快速整體的敏感性和專一性較差適用于小分子、半抗原檢測(cè),如Cortisol等


ELISA應(yīng)用場(chǎng)景


ELISA應(yīng)用范圍.png




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