ELISA，酶聯(lián)免疫法（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）是將免疫技術發(fā)展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法，利用抗原抗體的特異性反應，對樣本中可溶性目的產(chǎn)物進行定量檢測。

ELISA 與常規(guī)免疫實驗對比

ELISA樣本制備簡單；靈敏度高；特異性強；重復性好；操作簡單；檢測儀器易獲得。

常見ELISA種類

一、直接ELISA

原理：將抗原與固相載體連接，洗滌除去未結合的抗原及雜質。加酶標抗體進行孵育。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。CHED I洗滌未結合的酶標抗體。此時固相上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。加底物反應。直接法主要用于測定抗原。

二、間接法ELISA

原理：將抗原與固相載體相連結，形成固相抗原。洗滌除去未結合的抗原及雜質。加入特異性一抗與固相抗原相結合，形成固相抗原抗體復合物。經(jīng)洗滌后，加酶標二抗。固相免疫復合物中的抗體與酶標二抗結合，從而間接地標記上酶。洗滌后，加底物顯色。

三、雙抗夾心法ELISA

原理：雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子，但不適用于小分子抗原。將特異性抗體（捕獲抗體）與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。加入待檢樣品，保溫孵育。樣品中的特異性抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。加酶標抗體（檢測抗體）保溫孵育。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。CHEDI洗滌未結合的酶標抗體。加底物反應。

雙抗原夾心法測抗體的反應模式與測抗原相似，用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。

四、競爭法ELISA

原理：競爭法ELISA最為復雜，通常用于檢測小分子如半抗原、激素、藥物等。樣品中待檢游離抗原與固定于固相載體上的抗原一起競爭相同的有XIANLIANG抗體，當樣品中的游離抗原越多，就可結合越多的抗體，而固相抗原只能結合較少的抗體。反之亦然。經(jīng)洗滌去除樣品中的抗原與抗體的結合物，只留下固相抗原與抗體的結合物。顯示經(jīng)計算可得樣品中抗原的含量。競爭法可根據(jù)實驗設置直接法、間接法或夾心法形式。

不同 ELISA 檢測方法比較

ELISA應用場景