小鼠白細胞介素5(IL-5)ELISA試劑盒檢測原理

將目標抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中的目標連接于固相載體上的抗體結合，然后加入辣根過氧化物酶標記的抗體，將未結合的抗體洗凈后再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。

▎  重復性

板內，板間變異系數均<10%。

▎  批內差

取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進行定量檢測，每份樣本連續(xù)測定20次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。

▎  批間差

選取3個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本定量測定，每個樣本使用同一試劑盒重復測定8次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值

精密度

精密度用樣品測定值的變異系數CV表示。CV（%）=SD/mean×100  CV<10% Inter-批間差: CV<13%

穩(wěn)定性

經測定，試劑盒在有效期內按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。
為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影響，實驗室的環(huán)境條件需盡量保持一致，尤其是實驗室內溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進行操作可減少人為誤差。

為了幫助您更好地解決在實驗中可能碰到的各種問題，我們設計了這些問題指導，配以試劑盒內的說明書一起供您參考使用。很多因素都將導致免疫測定實驗的失敗，而大多數技術失誤是可以通過全面閱讀和準確理解說明書以及實驗步驟來避免的。若對試劑盒內的說明書有任何意見和建議，歡迎反饋。我們期待聽到您的聲音，從而完善我們的產品，更好地為您服務。
◆ 仔細閱讀說明書
◆ 檢查試劑盒標簽上的有效期。如果超過有效期，請勿使用。
◆ 按說明書確定所有試劑齊全（數量、體積）
◆ 標本制備要規(guī)范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。
短期內無法實驗者，注意低溫保存
◆ 準備好所有實驗額外所需物品， （比如移液器，試管，清洗器， 酶標儀）
◆ 按說明書將所用試劑平衡至室溫，根據檢測標本數量確定所需試劑的量
◆ 檢查試劑盒內每種試劑的貯存條件，保證所有試劑均按照試劑盒內說明書推薦的條件存儲。
◆ 檢查不穩(wěn)定或者變質的試劑溶液（比如沉淀或變色）。有些試劑，比如標準品稀釋液或者檢測稀釋液，可能在設計時就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標板之前，必需充分混勻。而由于沉淀物的特性，在加入酶標板之前，必需不停攪拌。
◆ 保證充分的孵育時間和溫度。
◆ 切勿使用不同生產批號的試劑取代現有試劑或混合現有試劑。
◆ 在混合或溶解蛋白溶液時，避免泡沫產生。
◆ 在實驗開始之前，安排好實驗流程。
◆ 在實驗開始之前，清潔工作臺。
◆ 若有問題，應與我公司或代理商進行溝通。