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上海帛科生物技術(shù)有限公司

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海藻糖酶(TREH)真核蛋白操作步驟

閱讀:692      發(fā)布時(shí)間:2023-7-12
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海藻糖酶(TREH)真核蛋白操作步驟:


Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取


1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。


2.  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次,注意低溫操作;


3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,4℃離心5 min;


4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);


5. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。


Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取


1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;


2. 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次;


3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。


4. 細(xì)胞洗滌后,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:


細(xì)胞數(shù)量


Lysis Buffer加入量


107個(gè)


0.5 mL~1 mL


5×106個(gè)


0.2 mL~0.5 mL


5.置于4℃搖床平臺(tái)上,溫和振蕩15 min;


6. 14,000rpm,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);


7. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融


硅膠膜DNA離心吸附柱(大提)收集管(見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品)

硅膠膜離心吸附柱(小提)收集器(見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品)

硅膠膜離心吸附柱系列(15層膜,小提)

硅膠膜離心吸附柱再生液

生物磁珠2:殼聚糖磁珠

生物磁珠2:巰基磁珠(停產(chǎn))

生物磁珠2:醛基磁珠(停產(chǎn))

生物磁珠2:無包被磁珠

生物磁珠:氨基磁珠

生物磁珠:硅基磁珠

生物磁珠:環(huán)氧基磁珠

生物磁珠:羧基磁珠

酸洗玻璃珠系列

微量單鏈DNA定量試劑盒核酸電泳套裝

一站式DNA非變性PAGE電泳套裝

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一站式miRNA尿素-PAGE電泳套裝

一站式RNA電泳套裝

核酸電泳液

50×TAE電泳液(2500 mL)

RNA電泳液,10×(100 mL)

RNA電泳液,10×(250 mL)

TBE Running Buffer(TBE電泳液,10×)

超快核酸電泳液(干粉)(20 L)

超快核酸電泳液(干粉)(50 L)

核酸電泳液:50×TAE電泳液(250 mL)


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