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試劑配制：
1、酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
2、標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
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實驗標準品圖：
40 ng/L，5號標準品，150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
20 ng/L，4號標準品，150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
10 ng/L，3號標準品，150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
5 ng/L，2號標準品，150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.5 ng/L，1號標準品，150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規(guī)定的反應溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關鍵。
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。

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黑木耳 Auricularia auricula桿菌屬 Lactobacillus sp.

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小鼠肝星形細胞*培養(yǎng)基TF-1(人血液白血病細胞)

葡萄球菌屬 Staphylococcus sp.酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis

費氏中華根瘤菌 Sinorhizobium fredii猴菌

MV3(人黑色素瘤細胞)短小芽胞桿菌 Bacillus pumilus

珊瑚色諾卡氏菌 Nocardia corallineWB-F344(大鼠肝上皮樣干細胞)

草菇 Volvariella bombycina酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis

小鼠膀胱成纖維細胞*培養(yǎng)基苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti

大鼠腎上皮細胞*培養(yǎng)基rRTEC, 大鼠腎小管上皮細胞

土曲霉 Aspergillus terreus少根根霉 Rhizopus arrhizus

石蕊殺菌素鏈霉菌 Streptomyces litmocidini苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti

Lane Marker Loading Buffer(5x)/蛋白示蹤上樣緩沖液(非還原，5x)人腺細胞

嗜熱脂肪地芽孢桿菌 Geobacillus stearothermophilusHK-2, 人腎皮質近曲小管上皮細胞