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目錄:上海帛科生物技術有限公司>>生化檢測試劑盒>>土壤系列>> 土壤中性磷酸酶(SNP)測試盒微量法

土壤中性磷酸酶(SNP)測試盒微量法
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具體成交價以合同協(xié)議為準
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更新時間:2023-12-25 09:29:15瀏覽次數(shù):864評價

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貨號 BK-01S6839
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商品介紹:

測定意義:

土壤磷酸酶是催化土壤有機磷礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉化及其生物有效性,是評價土壤磷素生物轉化方向與強度的指標。磷酸酶活性受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH的顯著影響,根據(jù)最適PH范圍,一般把土壤磷酸酶分為中性、酸性和堿性三種類型。

測定原理:

中性環(huán)境中,S-NP催化磷酸苯二鈉水解生成和,通過測定酚的生成量即可計算出NP活性。

自備儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測方法

貨號

土壤中性磷酸酶(SNP)測試盒微量法

100管/96樣

微量法

BK-01S6839

11.png 

實驗結果判斷我有妙招:

1、定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應的物質要密封,并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。

操作步驟:

1. 樣品的準備:

a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。

b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

DTM添加劑2  1ml*5

5g 甲基紅 Methyl Red 室溫陰涼干燥保存

50T 牛呼吸道合胞病毒PCR檢測試劑盒  低溫運輸,-20℃保存

12x50nm Cyanine 5-NHS Ester Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

500mL Blotto in TBS with azide   Blotto in TBS with azide   常溫保存

5次 填入法DNA末端標記試劑盒B Fill-in DNA End Labeling Kit -20℃保存

2 ug pGL4.19[lucCP/Neo] pGL4.19[lucCP/Neo] 低溫運輸,-20℃保存

XLD瓊脂 XyloseLysineDesoxycholate Agar Medium 250g

1瓶 Hce-8693細胞株 Hce-8693 低溫運輸和保存

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ALDH16A1  乙醛脫16家庭A1抗體 規(guī)格: 0.2ml

IGF I  胰島素樣生因子1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Calumenin/CALU  鈣腔蛋白 規(guī)格: 0.1ml

GZMA/Granzyme A  顆粒A抗體 規(guī)格: 0.2ml

CK7  細胞角蛋白7抗體 規(guī)格: 0.1ml

Mouse Anti-human IgG(3D3)/Bio  標記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-RAD9(Ser336)  磷酸化細胞周期檢查控制蛋白質抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit anti-Monkey IgG whole serum  兔抗猴IgG抗清 規(guī)格: 1ml

LCA/Lens culinaris agglutinin  扁豆凝集素 規(guī)格: 0.2ml

FHIT  脆性組三聯(lián)體抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-cdc2 (Ser39)  磷酸化周期素依賴激2抗體 規(guī)格: 0.1ml

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