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組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
鹽酸胍RCAS1 (D2B6N) XP® Rabbit mAb1-Cbz-氨基環(huán)烷羧酸

側(cè)金盞花,阿東糖,核糖RCAS1 (D2B6N) XP® Rabbit mAb1-甲基-1H-吡唑-酸

酵母浸粉；酵母粉Proin A (HRP Conjuga)吡咯并[2,D]嘧啶

核糖核酸酶 A 溶液AD1 (D9X2L) Rabbit mAb氨基-甲基噻吩-2-甲酸甲酯

N,N'-亞甲基雙酰ATP2A1/SERCA1 (D54G12) Rabbit mAb異基酚

D-葡萄糖一水CUEDC2 Antibody2,二甲基-5-基-1H-吡咯-羧酸

十二烷基硫酸鈉(分子生物學(xué)級(jí))FXR1 (D10A2) XP® Rabbit mAb甲基膦酸二酯

聚二6000FXR1 (D10A2) XP® Rabbit mAb7-吲哚酮

吐溫20PKR (D7F7) Rabbit mAb2,二氮雜萘

5-溴--吲哚基-beta-D-葡糖苷酸環(huán)己鹽(X-GLUC)PhosphoPlus® Chk2 (Thr68) Antibody Duet芐氧羰基-N-芐基-Beta-氨酸

曲拉通X-100Pontin/RUVBL1 Antibody代硫代甲酰

胰蛋白胨APC2 Antibody2--5-甲酸

生物素;D-生物素;維生素 H 輔酶 RPhospho-Chk1 (Ser317) (D12H3) XP® Rabbit mAb2,2-二氟

甘油Phospho-Chk1 (Ser317) (D12H3) XP® Rabbit mAb2,8-雙(三氟甲基)-羥基喹啉

檸檬酸鈉二水；檸檬酸三鈉二水CIN85 (D1A4) Rabbit mAb2-溴甲二縮

酸Thap11/Ronin Antibody3,5-二甲基哌啶(順反異構(gòu)體混和物)

明膠CDX2 (D11D10) Rabbit mAbN(α)-Z-L-2,二氨基酸

Bacto酵母浸粉(BD原裝)Phospho-mTOR (Ser2448) Blocking Peptide -6,7-二甲氧基喹啉

兔6酮F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒DOK1  D酪氨酸激酶衰減蛋白1100 ul

豚鼠ELISA試劑盒DOK2  D酪氨酸激酶衰減蛋白2100 ul

豚鼠組(HIS)ELISA試劑盒Phospho-p56Dok2(Tyr351)  酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白220 ul

豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒Phospho-p56Dok2(Tyr299)  酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2300 ul

豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒Phospho-p56Dok2(Tyr142)  酸化D酪氨酸激酶衰減蛋白2100 ul

豚鼠孕激素(progestogen)ELISA試劑盒DPPA2  多能發(fā)育相關(guān)基因2100 ul

豚鼠型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)ELISA試劑盒DR3/APO3  死亡受體3100 ul

豚鼠型肝炎病毒表面(HBsAb)ELISA試劑盒DR4/APO2  死亡受體4100 ul

豚鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒Death receptor 5/DR5/CD262  腫瘤細(xì)胞調(diào)亡素/死亡受體5100 ul
馬皰疹病毒型PCR檢測試劑盒價(jià)格生發(fā)中心相關(guān)核蛋白MCM3抗體Periplocogenin中文名：別名：分子式：C28H42O6

生長休止特定蛋白1抗體Wallicoside中文名：斷節(jié)參苷別名：分子式：C61H98O26

糖磷脂酰肌醇錨定蛋白137抗體Periplocoside N中文名：別名：分子式：C27H44O6

減數(shù)分裂核分裂蛋白1抗體Trillin中文名：延齡草苷別名：Diosgenin glucoside分子式：C33H52O8

胰高血糖素樣肽2受體抗體rsodeoxycholic acid中文名：熊去氧膽酸別名：分子式：C24H40O4