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注意事項：
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當注意避免反復(fù)凍融。
如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
用于流式細胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
產(chǎn)品名稱：倉鼠卵巢細胞
英文簡稱：Lec1細胞
貨號：LZ-X969421
規(guī)格：T25
生長特性：
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價，產(chǎn)品貨期短，價格優(yōu)，售后齊全。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低 1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；
蠟狀芽孢桿菌L-異亮氨酸;L-Isoleucine腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基凋亡敏感性基因
敏捷食酸菌銀杏內(nèi)酯J;GinkgolideJ膽汁液態(tài)培養(yǎng)基天冬氨酸-胱氨酸特異性蛋白酶家族抗體
Thalassospirapermensis氧化石蒜堿;Lycobetaine假單胞菌瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基/CN瓊脂半胱酸蛋白酶-10抗體
Pseudomonasluteola鹽酸白屈菜紅堿;Chelerythrin萘啶酮酸1.5mg半胱酸蛋白酶蛋白-12抗體
Maritimibacteralkaliphilus銀杏酚酸;Ginkgolicacids甘油半胱酸蛋白酶蛋白-13抗體
Herbaspirillumcanariense野菊花內(nèi)酯;Yejunualactone金氏B培養(yǎng)基半胱酸蛋白酶蛋白-3抗體
Herbaspirillumaurantiacum2-O-乙酰山椒子烯酮;乙酰肉湯半胱酸蛋白酶蛋白-6抗體
Herbaspirillumsoli柚皮素-7-O-葡萄糖酸苷;Narin氧化酶試紙半胱氨酸蛋白酶8抗體
Sphingomonasyunnanensis異水飛薊賓;Isosilybin鈉氏試劑白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6抗體
Massiliaaerilata異鼠李素-3-O-半乳糖苷;Isorha培養(yǎng)基β-連環(huán)蛋白抗體
Massiliahaematophila茵芋堿;Skimmianine庖肉培養(yǎng)基基礎(chǔ)核凋亡誘導(dǎo)因子蛋白1
Lysinibacillusmacroides一枝蒿庚素;BullatineG；so庖肉牛肉粒成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子抗體
紡綞形賴氨酸芽孢桿菌乙酰蝙蝠葛蘇林堿;O-diacetyld庖肉培養(yǎng)基膽囊收縮素抗體/縮膽囊素抗體
耐賴氨酸芽孢桿菌一葉萩堿;Securinine卵黃瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)兔抗瓜氨酸環(huán)肽抗體
少動鞘氨單胞菌異葒草素;Homoorientin50%卵黃鹽水懸液CC趨化因子受體1抗體
Lec1細胞突觸相關(guān)蛋白97抗體3,6-二水楊 DICHLOROSALICYLIC ACID, 3,6-(P)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat
神經(jīng)囊泡循環(huán)蛋白2抗體3,6-二水楊 DICHLOROSALICYLIC ACID, 3,6-(P)(PLEASE CALL)Human, Mouse
突觸相關(guān)蛋白29抗體DIBROMOHYDROQUINONE, 2,6-(P)(PLEASE CALL)Human, Mouse
突觸相關(guān)蛋白25結(jié)合蛋白抗體4,4'-二溴聯(lián)苯 DIBROMOBIPHENYL, 4,4'-(SG)Human, Mouse, Rat
突觸泡蛋白2B抗體1,4-二溴苯 DIBROMOBENZENE, 1,4-(SG)Human
突觸泡蛋白2C抗體硅藻黃質(zhì) DIATOXANTHIN(SH)Human, Mouse
突觸囊泡蛋白抗體2,6-二氨庚二 DIAMINOPIMELIC ACID, 2,6-(RG)Human
胞吐分泌蛋白Sec8抗體2,4-二氨-6--嘧啶 DIAMINO-6-CHLOROPYRIMIDINE, 2,4-(SH)Human
分化蛋白SEPT6抗體2,4-二氨-6--嘧啶 DIAMINO-6-CHLOROPYRIMIDINE, 2,4-(SH)Human, Mouse, Rat
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