DNA片段化代表晚期細胞凋亡的特征。凋亡細胞中的DNA斷裂可以通過末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）介導(dǎo)的dUTP缺口末端標記（TUNEL）檢測。適用于熒光酶標儀，熒光顯微鏡或流式細胞儀。在流行的FITC通道上可以輕松檢測到其信號。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Cell Meter TUNEL凋亡檢測試劑盒。

光譜：

適用儀器

流式細胞儀

Ex:488 nm

Em：530/30 nm

通道:FITC通道

熒光顯微鏡

Ex:FITC 濾波片組

Em：FITC 濾波片組

推薦孔板:黑色透明底板

熒光酶標儀

Ex:490 nm

Em：520 nm

Cutoff：510 nm

推薦孔板:黑色透明底板

讀取模式：底讀模式

實驗方案

樣品實驗方案

簡要概述

1. 用測試化合物準備細胞。

2. 與TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分鐘至1小時。

3. 洗滌細胞。

4. 用4％甲醛（可選）固定細胞。

5. 用帶FITC濾光片的熒光顯微鏡或帶FITC通道的流式細胞儀。讀取Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）處的熒光強度。

溶液配制

工作溶液配制

將0.5μL的100X Tunnelyte Green（組分A）添加到50μL的反應(yīng)緩沖液（組分B）中，使總體積為50.5μL的TUNEL工作溶液。避光。注意：應(yīng)單獨評估每個細胞系，以確定細胞密度。

實驗步驟

1.根據(jù)您的特定協(xié)議，將細胞培養(yǎng)至密度以誘導(dǎo)凋亡。對于在96孔板培養(yǎng)物中生長的貼壁細胞，我們建議大約30,000至50,000個細胞/孔，對于非貼壁細胞，建議大約1至2 x 106細胞/ mL。同時，在每種標記條件下，用誘導(dǎo)群體相同的密度培養(yǎng)非誘導(dǎo)陰性對照細胞群體。注意：我們用100 nM-1 µM星形孢菌素處理HeLa細胞4小時，以誘導(dǎo)細胞凋亡。

2.染色和固色：

2.1取出細胞培養(yǎng)基。
2.2向每個樣品中添加50µL TUNEL工作溶液。
2.3在37°C下孵育30-60分鐘。
2.4除去TUNEL工作溶液，并用200 µL /孔的PBS洗滌細胞1-2次。
2.5向每個樣品中添加100uL反應(yīng)緩沖液（組分B）。
2.6使用Ex / Em = 490/525 nm（cut off= 515 nm）的熒光酶標儀，帶有FITC濾光片組的熒光顯微鏡或帶有FITC通道的流式細胞儀檢測熒光強度。
2.7可選：從步驟5中移出反應(yīng)緩沖液，并向每個孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4％甲醛固定緩沖液（未提供）。注意：對于非貼壁細胞，請?zhí)砑铀枇浚ɡ?X106細胞/ mL）的4％甲醛固定液。
2.8在室溫下將平板孵育20至30分鐘。
2.9去除固定劑。
2.10用PBS洗滌細胞2-3次，并用100µL PBS /孔/ 96孔板替換。
2.11使用Ex / Em = 490/525 nm（cut off= 515 nm）的熒光酶標儀，帶有FITC濾光片組的熒光顯微鏡或帶有FITC通道的流式細胞儀檢測熒光強度。
2.12可選：用1X Hoechst（組分C）在Ex / Em = 350/460 nm處染色細胞核，以進行圖像分析

產(chǎn)品相關(guān)圖片

圖中所示。在海拉細胞TUNEL反應(yīng)的熒光圖像100海里的治療或1μM staurosporine (SS) 4小時與未經(jīng)處理的控制。與TUNEL細胞孵化工作解決方案1小時在37oC。分析了綠色熒光信號使用熒光顯微鏡和FITC過濾設(shè)置。熒光標記DNA鏈斷裂顯示強烈的熒光染色法在SS細胞治療。

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百螢-Cell Meter TUNEL凋亡檢測試劑盒綠色熒光光譜及實驗方案

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