JJ Red和JJ Green是百螢生物自主研發(fā)的核酸染料，JJ Green是一種結(jié)合于所有dsDNA雙螺旋的具有紅色/綠色激發(fā)波長的染料，它是Gel Red/Green、SYBR、EB核酸染料的替代品。今天小螢為大家?guī)淼氖沁@種核酸染料的相關(guān)問題解答。
1.在使用該染料進行凝膠電泳時，Marker分辨率低的主要原因是什么？
答：①Marker的加樣量：marker有一個推薦濃度范圍，選擇高的，樣品與Marker含量差別大， 也會造成條帶錯誤(這不會是染料的問題，用EB也會存在該問題)。正確的DNA上樣量是條帶清晰的保證。Marker應該選擇在目標片段大小附近的梯帶較密的，這樣比對才準確。另外注意的是，Marker的電泳條件也要符合DNA電泳的操作標準： 如果選擇λDNA/EcoR I的酶切marker，需要預先65℃加熱5min，冰上冷卻后使用。從而避免Hind Ⅲ或EcoR I酶切造成的粘性接頭導致的片段連接不規(guī)則或條帶信號弱等現(xiàn)象。
?、谀z不平整：梳子不干凈有污染，加樣孔不平整也會影響圖的效果；
?、垭娪緱l件：電壓不穩(wěn)，電泳時間不超過1h。電壓過高，會導致小片段跑出膠，出現(xiàn)條帶缺失現(xiàn)象。
?、芫彌_液：TBE的緩沖能力更強，如果緩沖液緩沖性能下降，會導致DNA電泳條帶模糊，不規(guī)則遷移等。TAE建議換成TBE效果更好。另外建議配膠時的緩沖液和電泳緩沖液是同時配制。
?、苋旧珓篔J Red是高靈敏的DNA熒光染料，適用于各種電泳分析，操作簡單：無須脫色或沖洗。至少可檢出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。JJ Red 與dsDNA 結(jié)合熒光信號會增強800-1000倍，用JJ Red染色的凝膠樣品熒光信號強，背景信號低?？蛇m用于多種電泳分析。注意觀察凝膠時應根據(jù)染料不同，使用合適的光源和激發(fā)波長，如果激發(fā)波長不對，條帶會出現(xiàn)模糊等情況。
2.在JJ Red / JJ Green性如何？
答：JJ Red / JJ Green已經(jīng)被證明是替代EB、Gel、SYBR染料更為的產(chǎn)品。不過，請使用這些試劑時，也要遵循實驗室條例等。
3.JJ Red / JJ Green的結(jié)合機制是什么？
答：JJ Red/ JJ Green作用原理通過靜電及電荷相互作用的結(jié)合。
4.JJ Red / JJ Green檢測下限是什么？
答：JJ Red/ JJ Green是超敏感的染料，至少可檢出20pg DNA。然而，染色的靈敏度取決于儀器的性能和曝光設置等。
5.可以重新融化JJ Red / JJ Green凝膠，再制備嗎？
答：可以，但好再添加一些染料，保證重新制備凝膠的信號強度。
6.可以提前制作JJ Red / JJ Green凝膠，儲存供以后使用嗎？
答：JJ Red和JJ Green染料是穩(wěn)定的。在保證瓊脂糖凝膠的完整性不會被破壞的前提下，你可以將預制的JJ Red / JJ Green凝膠儲存供以后使用。我們建議在2-8℃避光貯存凝膠。
7.用哪些儀器檢測JJ Red和JJ Green？
答：JJ Red兼容紫外透射儀和藍光透射儀，以及基于汞弧燈和氬離子激光的凝膠掃描儀。JJ Green可使用300 nm紫外透射儀檢測。
8.JJ Red和JJ Green可以用來染色單鏈DNA或RNA嗎？
答：JJ Red和JJ Green可用于單鏈DNA和RNA的染色，但JJ Red染單鏈核酸效果比JJ Green敏感5倍左右。使用熒光酶標儀的滴定實驗表明，JJ Red結(jié)合單鏈DNA和RNA熒光信號約是結(jié)合雙鏈DNA的一半左右。
