Amplite 熒光法fu酶A定量試劑盒   綠色熒光是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測輔*的試劑盒，輔*A（CoA）是所有形式的細胞生命中的通用和必需的輔因子，在許多生物合成，能量產(chǎn)生和降解途徑中充當主要的酰基載體。它在脂肪酸，丙酮酸氧化和檸檬酸循環(huán)的合成和氧化中起重要作用。 CoA的測量是研究許多生物系統(tǒng)中的生物過程和事件的基本任務(wù)之一。有一些試劑或檢測試劑盒可用于定量生物系統(tǒng)中的CoA含量。現(xiàn)有的商業(yè)套件要么缺乏靈敏度，要么程序繁瑣。我們的Amplite 熒光CoA 定量分析試劑盒提供超靈敏熒光測定法，通過檢測CoA中的-SH基團來定量CoA含量。我們在該試劑盒中使用的專有熒光CoA Green 染料在與-SH反應后變?yōu)閺姛晒?。該測定試劑盒可在100μL測定體積（40nM）中檢測少至4皮摩爾的CoA。它可以在方便的96孔或384孔微量滴定板格式下以Ex / Em = 490 / 520nm進行，并且無需分離步驟即可輕松適應自動化。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 熒光法fu酶A定量試劑盒   綠色熒光。

實驗方案

96孔板檢測示例

概述

準備CoA測定混合物（50μL）

添加CoA標準品或測試樣品（50μL）

在室溫下孵育10分鐘 -  1小時

監(jiān)測Ex / Em = 490/520 nm處的熒光增加

注意：在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分

操作步驟

1.準備CoA標準庫存解決方案：

將200μlddH2O加入CoA標準小瓶（組分C）中以制備1mM（1nmol / L）儲備溶液。

注意1：強烈建議使用已用氮氣噴射的ddH2O去除氧氣，以制備輔*A原液。

注意2：水溶液不穩(wěn)定，會迅速降解。 應儲存在2-8℃，并在1天內(nèi)使用。

2.準備100X CoA Green 原液：

將100μLDMSO（組分D）加入到小瓶CoA Green （組分A）中以制備100X儲備溶液。

注意：未使用的CoA Green 原液應分成一次性使用的等分試樣，保存在-20℃并避光。

3.準備CoA Assay混合物：

將50L 100X CoA Green 儲備溶液（來自步驟2）加入5mL測定緩沖液（組分B）中，并充分混合。

4.準備CoA標準品的連續(xù)稀釋液（0至30μM）：

4.1將30μLCoA標準儲備溶液（來自步驟1）加入970L測定緩沖液（組分B）中以產(chǎn)生30μM（30pmol / L）CoA標準品。

注意：稀釋的CoA標準溶液不穩(wěn)定，應在4小時內(nèi)使用。

4.2取200μL30μMCoA標準溶液，用Assay緩沖液（組分B）進行1：3連續(xù)稀釋，得到10,3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μM連續(xù)稀釋的CoA標準品。

4.3將CoA標準品和含CoA的測試樣品加入到實心黑色96孔微孔板中，如說明書中的表1和2所示。

注意：根據(jù)需要處理細胞或組織樣本。

5.運行CoA測定：

5.1將50μLCoA反應混合物（來自步驟3.1）添加至CoA標準品的每個孔，空白對照和測試樣品（參見步驟4.3），以使總CoA測定體積為100μL/孔。

注意：對于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μLCoA反應混合物。

5.2在室溫下孵育反應10分鐘至1小時，避光。

5.3用熒光板讀數(shù)器監(jiān)測Ex / Em = 490 / 520nm處的熒光增加