Amplite 熒光法神經(jīng)鞘磷脂檢測(cè)試劑盒   紅色熒光 是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)鞘磷脂的試劑盒，鞘磷脂主要發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞外表面，特別是神經(jīng)組織中，其在信號(hào)傳導(dǎo)中扮演著重要角色。有研究發(fā)現(xiàn)，鞘磷脂在尼曼匹克癥和無脂蛋白血癥中存在不正常的積累。Amplite鞘磷脂熒光法檢測(cè)試劑盒采用了靈敏的方法檢測(cè)中性鞘磷脂的活性和篩選其抑制劑。這個(gè)試劑盒利用特別的Amplite Red作為熒光探針直接定量被鞘磷脂酶水解作鞘磷脂所產(chǎn)生的磷酸*堿的含量。它可以用來檢測(cè)血液、細(xì)胞提取物或者其他溶液中鞘磷脂的含量。Amplite Red的熒光強(qiáng)度與磷酸*堿產(chǎn)生成比例，從而實(shí)現(xiàn)鞘磷脂酶的定量。本試劑盒可用于96或384微孔板分析，并且無需任何額外步驟，就可以輕易地實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 熒光法神經(jīng)鞘磷脂檢測(cè)試劑盒。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.準(zhǔn)備SMase工作溶液（50 µL）
2.加入鞘磷脂標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 µL）
3.在37°C下孵育1-2小時(shí)
4.加入鞘磷脂測(cè)定混合物（50 µL）
5.在室溫下孵育0.5-2小時(shí)
6.監(jiān)視Ex / Em = 540/590 nm處的熒光強(qiáng)度（在570 nm處截止）

溶液制備

1.儲(chǔ)備溶液

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 SMase儲(chǔ)備溶液（100X）：
將50 µL含0.1％BSA的PBS加入鞘磷脂酶（小瓶B）中，制成SMase儲(chǔ)備液（100X）。

1.2 Amplite Red儲(chǔ)備液（200X）：
將80 µL DMSO（組分G）加入小瓶Amplite Red（組分C）中，制成200X Amplite Red儲(chǔ)備液，避光。 注意：Amplite Red在存在硫醇（例如DTT和2-巰*乙醇）的情況下不穩(wěn)定。 反應(yīng)中DTT或2-巰*乙醇的終濃度應(yīng)低于10 µM。 Amplite Red在高pH（> 8.5）時(shí)也不穩(wěn)定。 反應(yīng)應(yīng)在pH 7-8下進(jìn)行。建議將pH 7.4用于測(cè)定緩沖液。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

鞘磷脂標(biāo)準(zhǔn)品
向1000 µL SMase反應(yīng)緩沖液（組分D）中加入2 µL 50 mM鞘磷脂（組分F），得到100 µM鞘磷脂標(biāo)準(zhǔn)溶液（SM7）。取100 µM鞘磷脂標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，以得到連續(xù)稀釋的鞘磷脂標(biāo)準(zhǔn)品（SM6-SM1）。

3.工作溶液

3.1 鞘磷脂酶（SMase）工作液：
將100X SMase儲(chǔ)液的全部?jī)?nèi)容物（50 µL）加入5 mL SMase Reaction Buffer（組分D）中，并混合均勻，以制備SMase工作溶液。 注意：應(yīng)立即使用SMase工作解決方案。

3.2 鞘磷脂工作液：
將全部含量（5 mL）的測(cè)定緩沖液（組分E）添加到酶混合瓶（組分A）中，并充分混合。 在開始測(cè)定之前，將25 µL 200X Amplite Red儲(chǔ)備液加到Enzyme Mix溶液瓶中以制成鞘磷脂測(cè)定混合物。 注意：鞘磷脂測(cè)定混合物應(yīng)立即使用，并避免光照。 較長(zhǎng)的存儲(chǔ)時(shí)間可能會(huì)導(dǎo)致較高的測(cè)定背景。