胱天蛋白酶Caspase 8熒光底物是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的熒光底物，半胱*酸蛋白酶在細胞凋亡或程序性細胞死亡中是必需的，在發(fā)育和成年生活的大多數(shù)其他階段，免疫系統(tǒng)中也需要一些半胱天冬酶用于淋巴細胞的成熟。細胞凋亡失敗是腫瘤發(fā)展和自身免疫疾病的主要原因之一。半胱天冬酶也參與缺血和阿爾茨海默病。凋亡caspase有兩種類型：引發(fā)劑和效應劑。 啟動子半胱天冬酶（例如，CASP2，CASP8，CASP9和CASP10）切割效應半胱天冬酶的無活性前體形式，從而它們。效應子半胱天冬酶（例如，CASP3，CASP6，CASP7）依次切割細胞內(nèi)的其他蛋白質(zhì)底物，以觸發(fā)細胞凋亡過程。該級聯(lián)反應的起始受半胱天冬酶抑制劑的調(diào)節(jié)。

AAT Bioquest提供一組藍色，綠色和紅色熒光底物，用于監(jiān)測caspase活性。AMC-，AFC-，R110-和ProRed - 衍生的蛋白酶底物是無色和非熒光的。通過半胱天冬酶切割阻斷蛋白酶可切割的肽殘基分別產(chǎn)生強烈的藍色，綠色或紅色熒光，其可以通過熒光儀器監(jiān)測。我們專有的ProRed 衍生的半胱*酸蛋白酶底物是用于熒光檢測各種半胱天冬酶活性的敏感的紅色指示劑。通常，R110和ProRed 底物比基于AMC-，AFC-或4-硝基苯胺的底物靈敏得多。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的胱天蛋白酶Caspase 8熒光底物。

操作方法

以下說明書僅提供指南，實際應根據(jù)您的具體需求進行修改。

1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase測定

1.1在DMSO中制備10mM儲備溶液。

1.2制備2X半胱天冬酶底物（50μM）測定溶液，如下所示：

50 L基質(zhì)原液

100L DTT（1M）

400L EDTA（100 mM）

10mL Tris緩沖液（20mM），pH = 7.4

1.3將等體積的半胱天冬酶標準品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液（來自步驟1.2）混合，并在室溫下孵育溶液至少1小時。

1.4使用熒光酶標儀檢測熒光，或使用吸光度酶標儀檢測吸光度。

2.細胞Caspase檢測使用細胞滲透FMK半胱天冬酶探針

2.1在DMSO中制備2-5mM儲備溶液。

2.2根據(jù)需要對細胞進行處理。

2.3通過用20mM Hepes緩沖液（HHBS）稀釋Hanks中的DMSO儲備溶液（來自步驟2.1），制備2X可滲透的半胱天冬酶底物（20μM）測定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物測定溶液（來自步驟2.3）混合等體積的處理細胞，并將細胞在37℃，5％CO 2培養(yǎng)箱中孵育至少1小時。

2.5用HHBS洗滌細胞至少一次。

2.6用流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監(jiān)測熒光強度。

3.細胞Caspase檢測使用細胞滲透性FMK Caspase探針（僅適用于＃13470-13476）

3.1通過向小瓶中加入50μLDMSO制備250X儲備溶液。

3.2根據(jù)需要對細胞進行處理。

3.3將250 X DMSO儲備溶液（來自步驟3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL細胞）添加到細胞溶液中，并將細胞在37°C，5％CO 2培養(yǎng)箱中孵育1 小時。

3.4用HHBS洗滌細胞至少一次。

3.5用流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監(jiān)測熒光強度。