胱天蛋白酶Caspase 8熒光底物(Ac-IETD)2-R110 綠是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的熒光底物，(Z-DEVD)2-R110是Caspase 9的熒光底物。因?yàn)楦呒兊牧_丹明110(R110)衍生底物被置于內(nèi)酯的構(gòu)型內(nèi)，因此是無色的，也不發(fā)出熒光。在Caspase蛋白酶（天冬氨酸蛋白水解酶或胱冬肽酶）的作用下，切割R110上的多肽而獲得具有強(qiáng)烈熒光的R110產(chǎn)物，該產(chǎn)物可在480nm（常見的熒光檢測儀上都具有這種激發(fā)光源）處被激發(fā)后，在510nm-530 nm處用熒光法檢測。R110衍生的Caspase底物可能是被廣泛用于檢測多種Caspase酶活性的底物中靈敏的熒光底物。我們的R110衍生底物是高純度的，并保證經(jīng)HPLC檢測不出R110，因這些殘留的R11可能會產(chǎn)生顯著的本底干擾。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的胱天蛋白酶Caspase 8熒光底物(Ac-IETD)2-R110 綠。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

以下說明書僅提供指南，實(shí)際應(yīng)根據(jù)您的具體需求進(jìn)行修改。

1.使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的一般溶液Caspase測定

1.1在DMSO中制備10mM儲備溶液。

1.2制備2X半胱天冬酶底物（50μM）測定溶液，如下所示：

50 L基質(zhì)原液

100L DTT（1M）

400L EDTA（100 mM）

10mL Tris緩沖液（20mM），pH = 7.4

1.3將等體積的半胱天冬酶標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液（來自步驟1.2）混合，并在室溫下孵育溶液至少1小時。

1.4使用熒光酶標(biāo)儀檢測熒光，或使用吸光度酶標(biāo)儀檢測吸光度。

2.細(xì)胞Caspase檢測使用細(xì)胞滲透FMK半胱天冬酶探針

2.1在DMSO中制備2-5mM儲備溶液。

2.2根據(jù)需要對細(xì)胞進(jìn)行處理。

2.3通過用20mM Hepes緩沖液（HHBS）稀釋Hanks中的DMSO儲備溶液（來自步驟2.1），制備2X可滲透的半胱天冬酶底物（20μM）測定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物測定溶液（來自步驟2.3）混合等體積的處理細(xì)胞，并將細(xì)胞在37℃，5％CO 2培養(yǎng)箱中孵育至少1小時。

2.5用HHBS洗滌細(xì)胞至少一次。

2.6用流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光強(qiáng)度。

3.細(xì)胞Caspase檢測使用細(xì)胞滲透性FMK Caspase探針（僅適用于＃13470-13476）

3.1通過向小瓶中加入50μLDMSO制備250X儲備溶液。

3.2根據(jù)需要對細(xì)胞進(jìn)行處理。

3.3將250 X DMSO儲備溶液（來自步驟3.1）以1：250的比例（例如2 uL至500 uL細(xì)胞）添加到細(xì)胞溶液中，并將細(xì)胞在37°C，5％CO 2培養(yǎng)箱中孵育1 小時。

3.4用HHBS洗滌細(xì)胞至少一次。

3.5用流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光強(qiáng)度。