PhosphoWorks 發(fā)光測(cè)定ATP測(cè)定試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)ATP的試劑盒，三磷酸腺苷（ATP）在細(xì)胞能量生成，代謝調(diào)節(jié)和細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中起著基本作用。 PhosphoWorks ATP檢測(cè)試劑盒提供了一種快速，簡(jiǎn)單且均一的發(fā)光檢測(cè)方法，用于測(cè)定哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性。 該測(cè)定可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行。 此測(cè)定法的高靈敏度允許在許多生物系統(tǒng)，環(huán)境樣品和食品中檢測(cè)ATP。 該P(yáng)hosphoWorks ATP分析試劑盒每孔可檢測(cè)低至10個(gè)細(xì)胞。 它具有穩(wěn)定的發(fā)光，無需混合或分離，并且配方具有小的動(dòng)手時(shí)間。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的PhosphoWorks 發(fā)光測(cè)定ATP測(cè)定試劑盒。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.用測(cè)試化合物（100 µL / 96孔板或25 µL / 384孔板）制備細(xì)胞（樣品）
2.加入等體積的ATP工作溶液（100 µL / 96孔板或25 µL / 384孔板）
3.在室溫下孵育10-20分鐘
4.監(jiān)控發(fā)光強(qiáng)度

溶液配制

工作溶液配制

1.將全部反應(yīng)緩沖液（組分C，10 mL）轉(zhuǎn)移到ATP傳感器（組分B）中，并充分混合。

2.將20 µL ATP監(jiān)測(cè)酶（組分A）添加到組分B + C的瓶子中，并充分混合以制成ATP工作溶液。 注意：避免來自外源性生物來源的潛在ATP污染。

樣品操作

1.運(yùn)行ATP分析：

1.1通過在所需化合物緩沖液中加入10 µL的10X化合物（用于96孔板）或5 µL的5X化合物（用于384孔板）來用測(cè)試化合物處理細(xì)胞（或樣品）。對(duì)于空白孔（沒有細(xì)胞的培養(yǎng)基），添加相應(yīng)量的化合物緩沖液。

1.2將細(xì)胞板在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育所需的時(shí)間，例如24、48或96小時(shí)。

1.3向每個(gè)孔中添加100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）的ATP工作溶液。

1.4在室溫下孵育10-20分鐘。

1.5使用標(biāo)準(zhǔn)發(fā)光計(jì)監(jiān)控發(fā)光強(qiáng)度。

2.生成標(biāo)準(zhǔn)ATP校準(zhǔn)曲線：

如果需要計(jì)算樣品中ATP的量，則應(yīng)與上述測(cè)定法一起生成ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.1通過包含不含ATP的樣品（作為對(duì)照）來測(cè)量背景發(fā)光，在含0.1％BSA的PBS緩沖液中稀釋一系列ATP。注意：通常，ATP濃度從1 nM到10 µM是合適的。

2.2將相同量的稀釋的ATP溶液添加到一個(gè)空板中（對(duì)于96孔板是100 µL，對(duì)于384孔板是25 µL）。

2.3加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的ATP工作溶液。

2.4將反應(yīng)混合物在室溫下孵育10至20分鐘。

2.5使用標(biāo)準(zhǔn)發(fā)光計(jì)監(jiān)控發(fā)光強(qiáng)度。

2.6生成ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線。