樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1. 用5×105至1×106細(xì)胞/ mL的密度制備含測(cè)試化合物的細(xì)胞

2. 在0.5 mL細(xì)胞溶液中加入1 µL 500X Nuclear Violet

3. 在室溫下孵育30-60分鐘

4. 使用405nm紫色光激發(fā)流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析

實(shí)驗(yàn)步驟

1.對(duì)于每個(gè)樣品，請(qǐng)?jiān)?.5 mL的溫暖培養(yǎng)基或自備緩沖液中以5×105至1×106細(xì)胞/ mL的密度制備細(xì)胞。注意：應(yīng)單獨(dú)評(píng)估每種細(xì)胞系，以確定誘導(dǎo)凋亡的細(xì)胞密度。

2.用測(cè)試化合物處理細(xì)胞，以誘導(dǎo)凋亡或其他細(xì)胞周期功能。

3.向含有生長(zhǎng)培養(yǎng)基的細(xì)胞中加入1µL 500X Nuclear Violet （組分A），并在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育細(xì)胞30至60分鐘。注意：對(duì)于貼壁細(xì)胞，用0.5mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整，并在用Nuclear Violet 孵育之前用含血清的培養(yǎng)基洗滌一次。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所用的單個(gè)細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。注意：DNA染色前無需固定細(xì)胞，因?yàn)镹uclear Violet 具有細(xì)胞滲透性。

4.可選：以1000 rpm離心細(xì)胞4分鐘，然后將細(xì)胞重懸于0.5 mL檢測(cè)緩沖液（組分B）或自備緩沖液中。

5.使用405 nm紫色激光（Ex / Em = 405/445 nm）通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度