樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1. 用5×105至1×106細(xì)胞/ mL的密度制備含測試化合物的細(xì)胞

2. 將1 µL 500X Nuclear Red CCS2添加到0.5 mL細(xì)胞溶液中

3. 在37°C，5％CO2下孵育10-30分鐘

4. 使用帶有PE-Texas Red通道的流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞（Ex / Em = 488 nm / 615 nm）

實(shí)驗(yàn)步驟

1.對于每個(gè)樣品，以0.5×105至1×106細(xì)胞/ mL的密度在0.5 mL溫暖的培養(yǎng)基或自備緩沖液中制備細(xì)胞。注意：應(yīng)單獨(dú)評估每個(gè)細(xì)胞系，以確定細(xì)胞密度。

2.用測試化合物處理細(xì)胞一段時(shí)間，以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，細(xì)胞周期停滯或其他細(xì)胞周期功能。

3.在含有生長培養(yǎng)基的細(xì)胞中加入1 µL 500X Nuclear Red CCS2（組分A）。

4.將細(xì)胞在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育10至30分鐘。注意：對于貼壁細(xì)胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整，并在用Nuclear Red CCS2孵育之前用含血清的培養(yǎng)基洗滌一次。合適的孵育時(shí)間取決于所用的單個(gè)細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。染色前無需固定細(xì)胞，因?yàn)镹uclear Red CCS2具有細(xì)胞滲透性。

5.可選：將細(xì)胞以1000 rpm的速度離心4分鐘，然后將細(xì)胞重懸于0.5 mL的測定緩沖液（組分B）或自備的緩沖液中。

6.使用帶有PE-Texas Red通道（Ex / Em = 488/615 nm）的流式細(xì)胞儀檢測熒光強(qiáng)度。