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當(dāng)前位置:西安百螢生物科技有限公司>>熒光探針>> 20605鈣離子熒光探針Cal-520-*偶聯(lián)物

鈣離子熒光探針Cal-520-*偶聯(lián)物

參  考  價(jià)面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號20605

品       牌AAT Bioquest

廠商性質(zhì)代理商

所  在  地西安市

更新時(shí)間:2024-01-31 13:51:12瀏覽次數(shù):120次

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Ex?(nm) 493 Em?(nm) 515
分子量 1212.40 溶劑 Water
儲存條件 在零下15度以下保存,?避免光照
鈣離子熒光探針Cal-520-*偶聯(lián)物 和生物胞素以高親和力結(jié)合抗*蛋白和鏈霉抗*蛋白。 *和生物胞素可以與許多生物分子綴合而不會顯著改變靶分子的生物活性,因?yàn)樯锇厥窍鄬π〉姆肿印?/div>

鈣離子熒光探針Cal-520-*偶聯(lián)物 和生物胞素以高親和力結(jié)合抗*蛋白和鏈霉抗*蛋白。 *和生物胞素可以與許多生物分子綴合而不會顯著改變靶分子的生物活性,因?yàn)樯锇厥窍鄬π〉姆肿印?Cal-520-*和Cal-520生物胞素綴合物具有很好的鈣響應(yīng)。 他們的抗*蛋白和鏈霉抗*蛋白復(fù)合物具有敏感的鈣響應(yīng)。 可以想象,Cal-520-*和Cal-520生物胞素綴合物可以與IgG-抗*蛋白或IgG-鏈霉抗*蛋白綴合物結(jié)合,用于監(jiān)測特定靶標(biāo)的空間鈣變化。存儲條件在零下15度以下保存, 避免光照規(guī)格5x50 ug價(jià)格3840Ex (nm)493Em (nm)515分子量1212.40溶劑Water。百螢生物為您提供優(yōu)質(zhì)的鈣離子熒光探針Cal-520-*偶聯(lián)物 。


實(shí)驗(yàn)方案

使用Cal-520 AM,Cal-570 AM或Cal-630 AM酯類

1.使用Cal-520 ,Cal-590 或Cal-630 AM酯:

       AM酯是非極性酯,其易于穿過活細(xì)胞膜,并且通過活細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞酯酶快速水解。AM酯廣泛用于非侵入性地將各種極性熒光探針裝載到活細(xì)胞中。但是,使用AM酯時(shí)必須小心,因?yàn)樗鼈円子谒?,特別是在溶液中。它們應(yīng)在使用前重新配制成高質(zhì)量的無水二甲基亞砜(DMSO)。DMSO儲備溶液可以在-20℃下干燥儲存并避光。在這些條件下,AM酯應(yīng)穩(wěn)定數(shù)月。以下是我們推薦的將Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活細(xì)胞的方案。該方案僅提供指南,實(shí)際應(yīng)根據(jù)您的具體需求進(jìn)行修改。

a)在高質(zhì)量無水DMSO中制備2至5 mM Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的儲備溶液。

b)在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天,將Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或?qū)⒌确莸闹甘緞﹥淙芤航鈨鲋潦覝亍T贖anks和Hepes緩沖液(HHBS)或您選擇的緩沖液(0.04%Pluronic®F-127)中制備10至20μM的染料工作溶液。細(xì)胞加載所需指示劑的確切濃度必須憑經(jīng)驗(yàn)確定。

注意:非離子型洗滌劑Pluronic®F-127有時(shí)用于增加Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c)如果您的細(xì)胞(如CHO細(xì)胞)含有有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,可將*磺舒(1-2 mM)加入染料工作溶液中(濃度為0.5-1 mM)以減少滲漏去酯化指標(biāo)。

d)將等體積的染料工作溶液(來自步驟b或c)加入細(xì)胞板中。

e)將染料加載板在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育60至90分鐘,然后在室溫下將板孵育另外30分鐘。

注意:孵育染料超過2小時(shí)可以為某些細(xì)胞系提供更好的信號強(qiáng)度。

f)用HHBS或您選擇的緩沖液(含有陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制劑,如1mM*磺舒,如果適用)替換染料工作溶液,以去除多余的探針。

g)在Ex / Em = 490 / 525nm(對于Cal-520 AM),540 / 5000nm(對于Cal-590 AM)或600 / 640nm(對于Cal-630 AM)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.測量細(xì)胞內(nèi)鈣響應(yīng):

為了確定溶液的游離鈣濃度或單波長鈣指示劑的Kd,使用以下等式:

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是實(shí)驗(yàn)鈣水平下指示劑的熒光,F(xiàn)min是不存在鈣時(shí)的熒光,F(xiàn)max是鈣飽和探針的熒光。

       解離常數(shù)(Kd)是探針對鈣的親和力的量度。 與校準(zhǔn)溶液相比,熒光指示劑的Ca結(jié)合和光譜性質(zhì)在細(xì)胞環(huán)境中變化非常顯著。 細(xì)胞內(nèi)指標(biāo)的原位反應(yīng)校準(zhǔn)通常產(chǎn)生顯著高于體外測定的Kd值。 通過在離子載體如A-23187,4-溴A-23187和離子霉素存在下將加載的細(xì)胞暴露于受控的Ca2+緩沖液來進(jìn)行原位校準(zhǔn)。 或者,細(xì)胞透化劑如洋地黃皂苷或X-100可用于將指示劑暴露于細(xì)胞外培養(yǎng)基的受控Ca2+水平。





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