樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1. 處理平板細(xì)胞。

2. 用目標(biāo)化合物處理孵育細(xì)胞。

3. 添加Lipoxite R590 / G525。

4. 除去介質(zhì)，并用PBS洗滌。

5. 通過(guò)FITC / TRITC或FITC / PE通道通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀分析樣品。

溶液配制 

工作溶液配制

通過(guò)將500X Lipoxite R590 / G525（組分A）以1:50稀釋到HHBS（組分B）中，制備Lipoxite R590 / G525的10X工作溶液。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.以所需的密度培養(yǎng)細(xì)胞，并在37°C含5％CO2的潮濕箱中孵育過(guò)夜。

2.根據(jù)需要用測(cè)試化合物處理細(xì)胞。 注意：對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照，以約250 µM（1X）的終濃度向細(xì)胞中添加過(guò)氧化氫（組分C）30分鐘。

3.向細(xì)胞中添加10X Lipoxite R590 / G525，終濃度為1X（例如，向90uL細(xì)胞中添加10uL）。

4.將細(xì)胞在5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中于37°C孵育30分鐘。

5.除去培養(yǎng)基，并用HHBS（組分B）或DPBS洗滌細(xì)胞三遍。

6.在染色后2小時(shí)內(nèi)，使用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀通過(guò)FITC/TRITC或FITC/PE通道檢測(cè)細(xì)胞的熒光。