Amplite NADP檢測試劑盒 藍色熒光是美國AAT Bioquest研發(fā)的檢測NADP的試劑盒，*酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和*酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是活細胞中發(fā)現(xiàn)的許多酶反應的兩個重要輔助因子。 NAD形成NADP，通過酯鍵將磷酸基團添加到腺苷核苷酸的2'位置。 NADP用于合成代謝生物反應，例如脂肪酸和核酸合成，其需要NADPH作為還原劑。在葉綠體中，NADP是在光合作用的初步反應中重要的氧化劑。通過光合作用產(chǎn)生的NADPH用作卡爾文光合作用循環(huán)中生物合成反應的還原能力。量化這些因子的產(chǎn)生或消耗是監(jiān)測酶介導的反應或篩選這些酶反應的調節(jié)劑或底物的重要方法。市場上有幾種用于量化NADPH或總NADP / NADPH量的試劑盒，但迄今為止在大量過量NADPH存在下檢測NADP是非常具有挑戰(zhàn)性的，因為NADP在260 nm處具有其吸收峰且不發(fā)熒光，使測量不實用。

Amplite NADP檢測試劑盒可快速檢測NADP。該試劑盒使用我們新開發(fā)的NADP傳感器Quest Fluor NADP試劑直接測量NADP。該試劑盒中使用的專有探針僅與NADP反應產(chǎn)生在Ex / Em = 420 / 480nm處熒光的產(chǎn)物，并且對NADPH幾乎沒有響應。該試劑盒可在100μL測定體積中檢測少至30 nM NADP，并在過量NADPH存在下監(jiān)測0.3％NADP產(chǎn)生。該測定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行，并且可以用于高通量篩選。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質的Amplite NADP檢測試劑盒 藍色熒光。

96孔板檢測示例

概述

準備NADP標準品或測試樣品（50μL）

添加20μLQuestFluor™NADP探針

添加20μL測定溶液

在室溫下孵育10-20分鐘

添加15μL增強劑溶液

在室溫下孵育10-20分鐘，監(jiān)測420/480 nm的熒光

注意：在開始實驗之前，在室溫下解凍每個試劑盒組分。

操作步驟

1.準備NADP儲備溶液：

將500μlddH2O加入到NADP標準品（組分D）的小瓶中以制備1mM NADP儲備溶液。

注意：未使用的NADP儲備溶液應分成單次使用的等分試樣并儲存在-20 ℃。

2.準備NADP標準品的連續(xù)稀釋液（0至10μM）：

2.1將10μL的NADP儲備液（來自步驟1）加入到990L H2O或PBS緩沖液中以產(chǎn)生10M NADP標準溶液。

注意：稀釋的NADP標準溶液不穩(wěn)定，應在4小時內使用。

2.2取200μL10μMNADP標準溶液，在H2O或PBS中進行1：3連續(xù)稀釋，得到NADP標準品的10,3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μM系列稀釋液。

2.3如表1所述，將50μL系列稀釋的NADP標準品和含有NADP的測試樣品加入黑色/固體底96孔微孔板中：

表1黑色/固體底部96孔微孔板中NADP標準品和測試樣品的布局

注意1：NS = NADP標準，BL =空白對照，TS =測試樣品。

注意2：將連續(xù)稀釋的NADP標準品（10μM至0.01μM）加入NS1至NS7的孔中，一式兩份。

3.運行NADP測定：

3.1將20μLQuestFluor NADP探針（組分A）溶液加入NADP標準品，空白對照品和測試樣品的每個孔中，充分混合。

3.2將20μL測定溶液（組分B）加入每個孔中，充分混合。

注意：對于384孔板，每孔加入25μL樣品和10μLQuestFluor™NADP探針和10μL分析溶液。

3.3在室溫下孵育反應10-20分鐘，避光。

3.4向每個孔中加入15μL增強劑（組分C），使總NADP測定體積為105μL/孔，并在室溫下孵育10-20分鐘，避光。

注意：對于384孔板，添加7.5 uL增強劑。

3.5使用熒光板讀數(shù)器在420/480 nm處檢測熒光增加。