無菌檢查、微生物限度檢查的所有操作均需在嚴(yán)格控制微生物污染的環(huán)境下進(jìn)行，操作環(huán)境的無菌保證程度將直接影響無菌檢查結(jié)果，為了保證無菌檢查用潔凈室(區(qū))環(huán)境的穩(wěn)定性，確保檢查結(jié)果的可靠性，對(duì)潔凈室(區(qū))的環(huán)境質(zhì)量采取合理的控制措施和評(píng)價(jià)方法是必要的。無菌檢查、微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)和局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，其全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染。單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。隔離系統(tǒng)按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。
無菌室應(yīng)采光良好、避免潮濕、遠(yuǎn)離廁所及污染區(qū)。面積一般不超過10平方米，不小于5平方米;高度不超過2.4m。由1~2 個(gè)緩沖間、操作間組成(操作間和緩沖間的門不應(yīng)直對(duì))，操作間與緩沖間之間應(yīng)具備滅菌功能的樣品傳遞箱。在緩沖間內(nèi)應(yīng)有洗手盆、毛巾、無菌衣褲放置架及掛鉤、拖鞋等，不應(yīng)放置培養(yǎng)箱和其他雜物;無菌室內(nèi)應(yīng)六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墻壁與地面、天花板連接處應(yīng)呈凹弧形，無縫隙，不留死角。操作間內(nèi)不應(yīng)安裝下水道。
無菌操作室應(yīng)具有空氣除菌過濾的單向流空氣裝置，操作區(qū)潔凈度100級(jí)或放置同等級(jí)別的超凈工作臺(tái)，室內(nèi)溫度控制18~26℃，相對(duì)濕度45%~65%。緩沖間及操作室內(nèi)均應(yīng)設(shè)置能達(dá)到空氣消毒效果的紫外燈或其他適宜的消毒裝置，空氣潔凈級(jí)別不同的相鄰房間之間的靜壓差應(yīng)大于5Pa，潔凈室(區(qū))與室外大氣的靜壓差大于10Pa。無菌室內(nèi)的照明燈應(yīng)嵌裝在天花板內(nèi)，室內(nèi)光照應(yīng)分布均勻，光照度不低于300lx。緩沖間和操作間所設(shè)置的紫外線殺菌燈(2~2.5W/平方米)，應(yīng)定期檢查輻射強(qiáng)度，要求在操作面上達(dá)40/μW/平方厘米，不符合要求的紫外殺菌燈應(yīng)及時(shí)更換。
無菌室應(yīng)每周和每次操作前用0.1%新潔爾滅或2%甲酚液或其他適宜消毒液擦拭操作臺(tái)及可能污染的死角，開啟無菌空氣過濾器及紫外燈殺菌1小時(shí)。在每次操作完畢，同樣用上述消毒溶液擦拭工作臺(tái)面，除去室內(nèi)濕氣，用紫外燈殺菌半小時(shí)。
無菌室的潔凈度檢查無菌室在消毒處理后，無菌試驗(yàn)前及操作過程中需檢查空氣中菌落數(shù)，以此來判斷無菌室是否達(dá)到規(guī)定的潔凈度，常有沉降菌和浮游菌測(cè)定方法。
沉降菌檢測(cè)方法及標(biāo)準(zhǔn);以無菌方式將3個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板帶入無菌操作室，在操作區(qū)臺(tái)面左、中、右各放1個(gè);打開碟蓋扣置，平板在空氣中暴露30分鐘后將碟蓋蓋好，置32.5℃±2.5℃培養(yǎng)48小時(shí)，取出檢查，3個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)平均不超過1個(gè)。
浮游菌檢測(cè)方法及標(biāo)準(zhǔn)：用專門的采樣器，宜采用撞擊法機(jī)理的采樣器，一般采用狹縫式或離心式采樣器，并配有流量計(jì)和定時(shí)器，嚴(yán)格按儀器說明書的要求操作并定期校驗(yàn)，采樣器和培養(yǎng)皿進(jìn)入被測(cè)房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，使用的培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或藥典認(rèn)可的其它培養(yǎng)基。使用時(shí)，先開動(dòng)真空泵抽氣，時(shí)間不少于5分鐘，調(diào)節(jié)流量、轉(zhuǎn)盤、轉(zhuǎn)速。關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上采樣器蓋子后調(diào)節(jié)縫隙高度。置采樣口于采樣點(diǎn)后，依次開啟采樣器、真空泵，轉(zhuǎn)動(dòng)定時(shí)器，根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時(shí)間。全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿置32.5℃±2.5℃培養(yǎng)48小時(shí)，取出檢查，浮游菌落數(shù)平均不得過5個(gè)/平方米。
每批培養(yǎng)基應(yīng)選定3只培養(yǎng)皿做對(duì)照培養(yǎng)。
無菌操作臺(tái)面或超凈工作臺(tái)還應(yīng)定期請(qǐng)有關(guān)部門檢測(cè)其懸浮粒子，應(yīng)達(dá)到100級(jí)(一般用塵埃粒子計(jì)數(shù)儀)檢測(cè)塵埃粒徑≥0.5μm的粒數(shù)不得超過3.5個(gè)/升，≥5μm的粒數(shù)為0，空氣流速應(yīng)≥0.35m/s，可根據(jù)無菌狀況必要時(shí)置換過濾器。
陽性對(duì)照和限度室的區(qū)別：
功能上不一樣，硬件上應(yīng)該是一樣的。
限度室主要是做限度檢查的即規(guī)定量樣品中含菌量。
陽性對(duì)照室是做陽性對(duì)照的，和一些加菌試驗(yàn)或檢測(cè)。
限度室是提供一個(gè)相對(duì)潔凈的環(huán)境供檢測(cè)用的。陽性室是提供一個(gè)固定的空間操作有菌的檢測(cè)的限度室的樣品可能會(huì)含菌，陽性室的樣品基本上都是要加菌的(如殺菌劑的殺菌效果，就要在殺菌劑中添加一定量的菌液)。
室和陽性室不能混用，否則在陽性室做限度檢查會(huì)出現(xiàn)假陽性;在限度室做有菌的檢測(cè)會(huì)污染限度室的環(huán)境。
另外限度室不是做無菌檢測(cè)的。無菌檢測(cè)應(yīng)該在單獨(dú)的無菌室操作。
常規(guī)來說，主要設(shè)備：
無菌室，超凈工作臺(tái)(或者隔離器)，集菌儀;
微生物限度室，超凈工作臺(tái)(或者隔離器)，一般微生物限度檢測(cè)儀，振搖儀(也可以手動(dòng)振搖不需要配置，根據(jù)企業(yè)情況)，混合器;
陽性室：生物安全柜，混合器。
除以上設(shè)備外，根據(jù)自己企業(yè)產(chǎn)品選配相應(yīng)輔助設(shè)備。
會(huì)員1.png)