我們所說的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室是生物學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)基本實(shí)驗(yàn)室。那么我們對(duì)于一個(gè)完備的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，我們都有哪些注意事項(xiàng)呢?
1、超凈工作臺(tái)微生物的培養(yǎng)都是在特定培養(yǎng)基中進(jìn)行無菌培養(yǎng)，那么無菌培養(yǎng)必然需要超凈工作臺(tái)提供一個(gè)無菌的工作環(huán)境。超凈工作臺(tái)的主要用途是微生物的接種及處理時(shí)的無菌操作。
2、無菌室(接種室)或接種箱要培養(yǎng)微生物，首先就需要接種，而接種必須在無菌條件下進(jìn)行。這就需要建造無菌室或接種箱，為接種創(chuàng)造必要的條件。無菌室可以建在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，作為實(shí)驗(yàn)室的一個(gè)小套間。面積為4~5平方米，高2.5米左右。無菌室外應(yīng)連接一個(gè)小緩沖間，面積為2平方米左右。緩沖間和無菌室的門不要建在同一條直線上，以減少空氣中雜菌進(jìn)入無菌室。無菌室和緩沖間應(yīng)作到清潔、密閉性好，室內(nèi)有換氣設(shè)備，以便在工作結(jié)束后更換室內(nèi)空氣。兩個(gè)房間中應(yīng)各安裝1盞30瓦紫外線燈管和照明用的日光燈，無菌室的紫外線燈應(yīng)懸吊在工作臺(tái)的正上方，距臺(tái)面1米，以發(fā)揮的消毒功能。無菌室內(nèi)的工作臺(tái)等用具用品，應(yīng)經(jīng)常保持清潔，避免雜菌污染。如果沒有條件建造無菌室，可以用木制的接種箱代替。接種箱結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，容易制作，其正面安裝玻璃，便于觀察。箱前方開兩個(gè)圓洞各接連1只套袖，操作時(shí)將兩臂從套袖伸入箱內(nèi)進(jìn)行操作。箱內(nèi)也應(yīng)懸吊一盞紫外線殺菌燈和一盞日光燈。
3、培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱有很多種類型，它的用途在于為微生物提供一個(gè)適宜的生長(zhǎng)環(huán)境。主要類型包括生化培養(yǎng)箱，霉菌培養(yǎng)箱，厭氧培養(yǎng)箱等。它們的區(qū)別主要在于：a.生化培養(yǎng)箱只能控制溫度。這類培養(yǎng)箱可作為一般細(xì)菌的平板培養(yǎng)。b.霉菌培養(yǎng)箱可以控制濕度和溫度。它主要用在霉菌的培養(yǎng)。c.CO2培養(yǎng)箱適用于厭氧微生物的培養(yǎng)，例如，雙歧桿菌。
4、天平它是用于精確稱量各類試劑。實(shí)驗(yàn)室常用的是電子天平，電子天平按照精度不同又有不同的級(jí)別。
5、微生物均質(zhì)器它的作用在于從固體樣品中提取細(xì)菌。用微生物均質(zhì)器制備微生物檢測(cè)樣本具有樣品無損傷、無污染、不升溫、不需要洗刷器皿，不需滅菌處理等特點(diǎn)，是微生物實(shí)驗(yàn)中使用較為方便的儀器。
6、菌落計(jì)數(shù)器菌落計(jì)數(shù)儀可幫助操作者計(jì)數(shù)菌落數(shù)量。通過放大、拍照、計(jì)數(shù)等方式準(zhǔn)確獲取菌落的數(shù)量。有些高性能的菌落計(jì)數(shù)器還可直接連接電腦來完成自動(dòng)計(jì)數(shù)的操作，方便快捷的計(jì)數(shù)。
7、微波爐/電爐它主要用于溶液的快速加熱，微生物固體培養(yǎng)基的加熱熔化。
8、高壓滅菌鍋微生物學(xué)所用到的大部分實(shí)驗(yàn)物品、培養(yǎng)基、試劑都應(yīng)嚴(yán)格通過消毒滅菌。滅菌鍋也有不同的大小型號(hào)，有些是手動(dòng)的，有些是全自動(dòng)的。用戶就要根據(jù)自己的需要選購(gòu)。
9、移液器它是用于精密量取各類液體。常見的液體量器有量筒、微量取液器、移液管、刻度試管、燒杯等。
10、冰箱冰箱是實(shí)驗(yàn)室中保存試劑和樣品的儀器。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中用到的試劑有些要求是4度保存，有些要求是負(fù)20度保存，實(shí)驗(yàn)人員一定要看清試劑的保存條件，放置在恰當(dāng)?shù)臏囟认卤４?。具體來說，不同溫度下保存的物品如下：a.4℃適合儲(chǔ)存某些溶液、試劑、藥品等。b.-20℃適用于某些試劑、藥品、配好的抗生素等。c.-80℃適合某些長(zhǎng)期低溫保存的樣品、大腸桿菌菌種、感受態(tài)等的保存。
11、生物安全柜微生物實(shí)驗(yàn)中所涉及到的部分試劑和樣品微生物有些是有毒的，對(duì)于操作人員來說傷害比較大。為了防止有害的懸浮微粒、氣溶膠的擴(kuò)散，可以利用生物安全柜對(duì)操作人員、樣品及樣品間交叉感染和環(huán)境提供安全的保護(hù)作用。
12、搖床搖床是實(shí)驗(yàn)室比較常用的一種儀器，在微生物實(shí)驗(yàn)操作過程中，液體培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需要在特定溫度下振蕩使用。
13、純水裝置純水裝置包括純水機(jī)和蒸餾水器。蒸餾水器的價(jià)格比較便宜，但在造水過程中需要有人值守;純水機(jī)價(jià)格高些，但是使用方便，可以儲(chǔ)存一定量的純水。純水的使用也有不同級(jí)別，實(shí)驗(yàn)中配制試劑，配制培養(yǎng)基均都需用純水。
14、生物顯微鏡由于微生物的體積比較小，所以在觀察時(shí)需要借助生物顯微鏡。生物顯微鏡主要用于微生物和微小物品結(jié)構(gòu)和形態(tài)等方面的觀察。
15、冷凍干燥機(jī)主要適用于細(xì)菌、微生物、酵母等的干燥作用。用于干燥保存易脫水的產(chǎn)品，在加水以后能夠再次恢復(fù)原材料的特性，不影響其生物活性。通過冷凍干燥，細(xì)菌之類的材料成為干燥狀態(tài)，從而不會(huì)發(fā)生化學(xué)改變。
16、分光光度計(jì)分光光度計(jì)在微生物試驗(yàn)中用于測(cè)定微生物懸液的濃度，可以正確選取合適的培養(yǎng)時(shí)間。一般是在600nm波長(zhǎng)測(cè)定菌液濃度。
17、恒溫箱用于恒溫條件下培養(yǎng)微生物。恒溫箱的調(diào)溫范圍一般為20～45℃之間。培養(yǎng)酵母菌和霉菌時(shí)，一般可調(diào)至28℃，培養(yǎng)細(xì)菌和放線菌時(shí)，可根據(jù)菌種的生長(zhǎng)溫度進(jìn)行調(diào)溫，一般為30～37℃。
18、電烘箱(干燥箱)用于玻璃器皿等物的烤干和滅菌。電烘箱的調(diào)溫的范圍一般為40～180℃，對(duì)玻璃器皿等物進(jìn)行滅菌時(shí)，可將溫度調(diào)至160℃，滅菌4小時(shí)，即可將器皿上的微生物全部殺死。滅菌完畢后，在電烘箱溫度還沒有降到50～70℃以前，不要打開電烘箱，以免器皿破裂。
19、恒溫水浴鍋水浴鍋是一種控溫裝置，水浴控溫對(duì)于樣品來說比較快速且接觸充分。有些微生物反應(yīng)需要在37度，42度，56度下水浴進(jìn)行，所以恒溫水浴鍋可以提供需要的溫度。
20、酸度計(jì)用于配制試劑時(shí)精確測(cè)量pH值，從而保證配制的溶液的精確性。有時(shí)也需要利用pH計(jì)測(cè)定樣品溶液的酸堿度。 21、離心機(jī)用于收集微生物菌體以及其他沉淀物。離心機(jī)有冷凍和常溫之分。有些樣品由于在常溫下不太穩(wěn)定，需要低溫環(huán)境，要視樣品的種類而定。
離心機(jī)洗要求：在離心機(jī)內(nèi)腔，設(shè)置多個(gè)清洗頭或清洗管，離心機(jī)可在不開蓋或運(yùn)轉(zhuǎn)過程中對(duì)離心機(jī)內(nèi)部進(jìn)行清洗。重點(diǎn)有以下幾個(gè)部位：①轉(zhuǎn)鼓底面及軸承座部位的清洗;②攔液板表面及轉(zhuǎn)鼓筒體外表面;③轉(zhuǎn)鼓筒體內(nèi)表面;④翻蓋內(nèi)表面及進(jìn)料、刮刀等裝置表面;⑤外殼內(nèi)表面。
離心機(jī)維護(hù)規(guī)則：(1)一次規(guī)則 當(dāng)系統(tǒng)出了故障，你可以試探性地改變某些狀態(tài)，一次可以改變一個(gè)參數(shù)。做一些簡(jiǎn)單的改變步驟，也許就能解決問題。 (2)二次比較規(guī)則在動(dòng)手檢修之前已經(jīng)明確了故障所在，或者已經(jīng)確定了解決故障的方案。換句話說，動(dòng)手之前已經(jīng)找對(duì)了解決辦法。例如，在進(jìn)樣過程中發(fā)現(xiàn)內(nèi)標(biāo)物的峰值變低了，可以重復(fù)進(jìn)樣看看重復(fù)性如何，如果是偶然變低，是否是定量管里進(jìn)了氣泡。這個(gè)規(guī)則可用于考察系統(tǒng)改變后的情況。更換了流動(dòng)向后在正式進(jìn)樣前可以進(jìn)兩次標(biāo)準(zhǔn)品以檢查保留時(shí)間的穩(wěn)定情況和色譜峰的穩(wěn)定性。在梯度洗脫中如果出現(xiàn)了多余的峰，可以空載梯度洗脫一次(真的有問題嗎?)，用此規(guī)則可以避免不必要的改變，盡快確定糾正措施。
(3)取代規(guī)則 用好的部件換下可疑的部件，是查找故障的方法。如果你懷疑檢測(cè)器引起了噪音，就換一個(gè)性能好的無轉(zhuǎn)子硫化儀檢測(cè)器。如果故障被排除了，就說明換下的檢測(cè)器有問題。這個(gè)規(guī)則應(yīng)用的規(guī)模有大有小，可以從換整個(gè)部件到換印刷線路板上的集成塊。 (4)換回規(guī)則這個(gè)規(guī)則和取代規(guī)則一起運(yùn)用，好部件取代了溶體流動(dòng)速率測(cè)定儀可疑部件后情況并未得到改善，應(yīng)重新?lián)Q上原部件。這樣做的維修費(fèi)用最小，也防止了用過的部件積壓下來無轉(zhuǎn)子硫化儀。這條規(guī)則僅適用于單一的故障。換回原則不適用于以下的情況： ①在取下時(shí)新部件已損壞(如泵密封墊圈); ②部件價(jià)格低(如柱內(nèi)襯過濾片); ③重新裝上原部件要冒損壞的風(fēng)險(xiǎn); ④定期更換的部件。
22、液氮罐液氮罐儲(chǔ)存液氮，可用于細(xì)菌、酵母、霉菌和大型真菌等各種微生物的長(zhǎng)期保存。
23、接種針用于接種和分離微生物。根據(jù)不同用途做成針狀、環(huán)狀、鉤狀、刀狀和鏟狀等。接種針由針頭和針柄兩部分組成。針頭由白金或鉻鎳合金(細(xì)電爐絲)制成，長(zhǎng)約7厘米。針柄可用玻璃棒或鋁管制成，長(zhǎng)約20厘米。將針頭燒結(jié)在針柄上即成。
24、酒精燈用于接種時(shí)對(duì)接種工具進(jìn)行滅菌。酒精燈火焰上部熱度，應(yīng)利用這一溫度區(qū)燒灼接種針或試管口。
25、均質(zhì)器均質(zhì)器使樣品處理過程中的設(shè)備。常用的均質(zhì)器主要是旋轉(zhuǎn)均質(zhì)器和拍擊式均質(zhì)器。旋轉(zhuǎn)式均質(zhì)器是靠旋轉(zhuǎn)的刀片將均質(zhì)杯中的樣品打碎。缺點(diǎn)是每次均質(zhì)都要更換刀片和均質(zhì)杯，樣品易受到污染，均質(zhì)過程中容易產(chǎn)生熱量使樣品中的微生物受損。 拍擊式均質(zhì)器使用無菌均質(zhì)袋，拍擊的機(jī)械裝置作用在均質(zhì)袋上，不和樣品直接接觸，因此不會(huì)受污染。拍擊式均質(zhì)器由于使用方便，不易受污染，使用越來越廣泛。但其缺點(diǎn)是均質(zhì)的力量不足，對(duì)于堅(jiān)硬的樣品不但無法均質(zhì)均勻，還會(huì)引起均質(zhì)袋的破損。
使用注意事項(xiàng)：(1)使用前先將電源插頭固定牢靠后，再打開機(jī)器開關(guān)。插頭不能使其出現(xiàn)松動(dòng)，因?yàn)闄C(jī)器工作時(shí)會(huì)產(chǎn)生振動(dòng)導(dǎo)致插頭脫落。這種突然短點(diǎn)對(duì)機(jī)器會(huì)造成損傷。 (2)均質(zhì)器工作時(shí)不準(zhǔn)隨便打開均質(zhì)器門，防止樣液飛濺(有的均質(zhì)器打開門以后自動(dòng)停止拍擊均質(zhì)) ，一定要先關(guān)機(jī)器再開門，然后同樣關(guān)閉門之后再開機(jī)。(3)使用均質(zhì)器之前，一定要檢查均質(zhì)器內(nèi)是否有異物，防止損傷機(jī)械裝置或均質(zhì)袋。(4)堅(jiān)硬樣品，盡量不要用拍打式均質(zhì)器，防止均質(zhì)袋破裂，冷凍樣品需緩化解凍以后才能使用拍擊式均質(zhì)器。當(dāng)一定要拍打堅(jiān)硬樣品時(shí)，加套均質(zhì)袋。(5)均質(zhì)器的底部是空的，如遇均質(zhì)袋意外破裂時(shí)，方便清理溢出物。(6)均質(zhì)器和均質(zhì)袋放置在陰涼干燥處，特別是均質(zhì)袋應(yīng)避酸堿、避陽(yáng)光，防止其過早的變脆老化。(7)均質(zhì)器用完之后，先關(guān)機(jī)斷電，然后將其內(nèi)外清理干凈。(8)對(duì)于一些拍打均質(zhì)后，容易堵塞移液管或移液器槍頭的樣品，建議使用帶過濾網(wǎng)的無菌均質(zhì)袋。
26、常用玻璃器皿①培養(yǎng)皿(平皿)：用于盛放固體培養(yǎng)基，是培養(yǎng)微生物和觀察微生物的主要器皿。一般直徑為9厘米?？筛鶕?jù)活動(dòng)規(guī)模準(zhǔn)備若干個(gè)。②試管：用于盛放斜面培養(yǎng)基(固體)，是接種微生物的主要器皿。常用的有兩種。較大的長(zhǎng)220毫米，直徑20毫米;較小的長(zhǎng)150毫米，直徑15毫米?？筛鶕?jù)需要選用其中一種并準(zhǔn)備若干個(gè)。③錐形瓶：用于盛放液體培養(yǎng)基。是用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物的主要器皿。一般容量為50、100、250、300、500、1000毫升?？筛鶕?jù)活動(dòng)需要選擇和準(zhǔn)備。④量筒、量杯：用于定量量取各種液體。⑤移液管(吸管)：一般容量為0.5、1、5、10毫升等，可根據(jù)需要選擇和準(zhǔn)備。⑥其它：燒杯、漏斗等。 注意事項(xiàng)：以上介紹的是微生物實(shí)驗(yàn)室的基本儀器配置，在組建實(shí)驗(yàn)室時(shí)還需要其他一些耗材，例如試管架，無菌采樣及稱樣袋，接種環(huán)，三角瓶，量筒，脫脂棉，紗布，試管筐，玻璃試管，滅菌吸管，涼干架，剪刀，鑷子，過濾器等。
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