標(biāo)簽: 多道移液器 移液器 科普 億康基因

億康基因所生產(chǎn)的單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒（YK001A/B ）常被用于單細(xì)胞基因組PCR實(shí)驗(yàn)?；驍U(kuò)增實(shí)驗(yàn)中，使用移液器、 多道移液器進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)需要注意以下幾點(diǎn)：

一、充分的實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

在基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要保證樣品區(qū)及PCR實(shí)驗(yàn)室的潔凈度，以避免樣本的DNA污染，并提前預(yù)備 好實(shí)驗(yàn)所需要的儀器及材料，包括 移液器、吸頭、多道移液器、PCR 管、離心管、離心管盒、PCR儀 、混勻儀、DNA清除劑、低溫冰箱等；

二、對照樣本的準(zhǔn)備

按照實(shí)驗(yàn)說明要求提前設(shè)置 5 μL 左右濃度為 30pg/  μL的基因組 DNA 作為陽性對照參考。注意稀釋DNA樣本時(shí)要使用去RNA酶的水。另外，對照品制作過程中，需要保證對照品的準(zhǔn)確度，由于操作的體積較小，必要時(shí)可使用微量移液器進(jìn)行操作。如需同時(shí)設(shè)置多個(gè)樣本，為避免重復(fù)操作過程中的也可以使用多道移液器 進(jìn)行移液操作。移液之前做好校準(zhǔn)工作，這樣可有效提高移液的準(zhǔn)確度。

三、PCR 擴(kuò)增過程

PCR擴(kuò)增過程中注意將 DNA 擴(kuò)增產(chǎn)物與預(yù)擴(kuò)增樣本 分開放置；PCR以外的下游工程實(shí)驗(yàn)容易造成核酸污染所以盡量不要在PCR實(shí)驗(yàn)室中混用。樣本準(zhǔn)備區(qū)、核酸提取室、PCR室、檢測區(qū)、數(shù)據(jù)分析區(qū)嚴(yán)格按規(guī)定獨(dú)立使用以避免交叉污染。對于 單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增需要保持整個(gè)擴(kuò)增過程都在同一 個(gè)PCR管或孔中進(jìn)行 。使用移液器吸液操作時(shí)盡量避免移液器吸頭過多接觸液體，造成樣本體積損失從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。利用多道移液器 進(jìn)行吸液時(shí)需要保證液面平齊。

實(shí)驗(yàn)步驟為：細(xì)胞裂解---MALBAC 預(yù)擴(kuò)增---指數(shù)式擴(kuò)增---擴(kuò)增產(chǎn)物分析----數(shù)據(jù)報(bào)告等五個(gè)階段。

總之，在單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)及其它PCR實(shí)驗(yàn)中，防止DNA及RNA污染是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。實(shí)驗(yàn)的每個(gè)環(huán)節(jié)中的防污染的細(xì)節(jié)我們都不可以忽略，所以，實(shí)驗(yàn)前注重加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)操作員的操作培訓(xùn)，養(yǎng)成嚴(yán)謹(jǐn)、認(rèn)真的實(shí)驗(yàn)態(tài)度也是很有必要的。

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