博奧龍-腹水專用佐劑-免疫佐劑

   貨號(hào)                       規(guī)格

 KX0210048-10        10mL 

 KX0210048-500      500mL .

佐劑（單抗腹水制備用） 貯存：4℃，避光（有效期3年） 

博奧龍-腹水專用佐劑-免疫佐劑是一種預(yù)先注入機(jī)體內(nèi)，能增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答能力或改變免疫應(yīng) 答類型的輔助物質(zhì)。主要用于在單克隆抗體腹水制備中，在小鼠腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞前， 注射本佐劑到腹腔內(nèi)，可以誘導(dǎo)雜交瘤細(xì)胞在腹腔內(nèi)快速增殖，并產(chǎn)生和分泌更多的抗體。 使用該佐劑小鼠腹水會(huì)比普通佐劑晚出 1.5 天-2 天，但通常情況下腹水的量是普通佐劑出量 的 1.5-2 倍，且單抗腹水效價(jià)不變。 

 1 致敏：將佐劑提前取出恢復(fù)至室溫，建議每組細(xì)胞準(zhǔn)備 2-3 只 8-10 周齡雌性 Balb/c 小 鼠，每只小鼠腹腔注射 0.3~0.5mL 腹水專用佐劑。

 2 誘導(dǎo)：致敏 15 天（一般 12-18 天）后，將篩選出來的雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)后接 種到 Balb/c 小鼠腹腔內(nèi)： 

2.1 推薦收集對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，1000rpm 5min 離心，1×PBS 反復(fù)洗滌 2-3 次，棄掉上 清液； 

2.2 用無菌的 1×PBS 緩沖液或生理鹽水，將單克隆的雜交瘤細(xì)胞重懸； 2.3 將細(xì)胞數(shù)調(diào)至約 0.8~1×10 6個(gè)每只，0.5mL/只腹腔注射小鼠左側(cè)或右側(cè)的下腹部， 避開肝臟和較低中腹部膀胱，沿腿的角度穿透腹膜，1mL 注射器針頭進(jìn)入 1/3 左 右，有刺空感。 

3 腹水收集：注射細(xì)胞 7 天左右小鼠腹部會(huì)開始腫脹，此時(shí)每日都應(yīng)進(jìn)行觀察，以防小鼠 突然死亡。

當(dāng)小鼠出現(xiàn)腹部明顯膨大、進(jìn)食困難、行走不便、毛色暗沉?xí)r將小鼠處死， 進(jìn)行一次性腹水的提取：

 3.1 小鼠脫頸椎處死，于 75%酒精浸泡消毒 5min；

 3.2 用鑷子提起小鼠腹部外皮，用將小鼠腹部剪開一個(gè)小口，剝離周圍皮膚露出 腹腔，隨后用 5mL 注射器吸出腹腔內(nèi)全部腹水，或?qū)⒏骨患糸_一個(gè)小口，將膠 頭滴管伸入腹腔內(nèi)將積液吸取至干凈的 15mL 離心管內(nèi)。

 3.3 3000rpm，10min 離心，無色透明的中間層即為腹水，勿吸取上層中的油狀物及離 心管底部的血細(xì)胞。

 4 儲(chǔ)存：離心后可以將腹水轉(zhuǎn)移至新的離心管內(nèi)-20℃凍存，也可與滅菌甘油等比混勻后 放于-20℃冰箱長期保存，若存儲(chǔ)時(shí)間較長，也可轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱。

同一株細(xì)胞誘導(dǎo)收 集的不同小鼠腹水可以合并儲(chǔ)存。