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北京宜能科創(chuàng)技術(shù)有限公司

色譜柱的使用經(jīng)驗(yàn)

時間:2022-7-30閱讀:65
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色譜柱在使用前,進(jìn)行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。

1、樣品的前處理:
a、使用流動相溶解樣品。
b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。 
c、使用0.45µm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
2、流動相的配制:
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點(diǎn):
a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
b、流動相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
c、流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e、流動相沸點(diǎn)不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。
f、在流動相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動相流速的選擇:
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求柱效,使用流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。當(dāng)選用流速時,分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時,可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。
注意:
a.由于甲醇廉價,對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外)。 
b.對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相,沒有提純的己烷不得使用。用水使用超純水(電阻率大于18兆歐),去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì),有可能影響分析結(jié)果。
c.含水流動相最*在實(shí)驗(yàn)前配制,尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。加入,防止細(xì)菌生長。
d.流動相要求使用0.45 µm濾膜過濾,除去微粒雜質(zhì)。
e.使用HPLC級溶劑配制流動相,使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命,提高柱性能。
沖柱子的目的

只要是有機(jī)溶劑就行,不過黏度不要太大,因?yàn)橛袡C(jī)溶劑能夠防止細(xì)菌生長,沖柱子的目的就是為了防止細(xì)菌生長堵塞儀器系統(tǒng)和柱子。一般甲醇和乙腈相互沖洗是沒有問題的,但乙腈要比甲醇價格貴的 。

柱頭塌陷

在使用過程中,填料下沉,在柱子進(jìn)口處出現(xiàn)一個小空間,使得分離效果不良。

補(bǔ)救方法:卸開柱頭螺絲,找一點(diǎn)同類填料,用甲醇濕潤后,添在柱子上,反復(fù)幾次。然后裝上螺絲,用溶劑沖洗1-2小時,使之平衡。

小結(jié)

正確使用緩沖鹽很有必要,既可以防止緩沖鹽析出,也可以達(dá)到提高色譜柱使用壽命的目的。我們不妨用一句話來總結(jié)它的使用方法:用前要過濾,用后需沖洗。



注:以上關(guān)于“色譜柱的使用經(jīng)驗(yàn)"的內(nèi)容由北京宜能科創(chuàng)技術(shù)有限公司編輯整理,轉(zhuǎn)載須注明來源

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