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北京宜能科創(chuàng)技術(shù)有限公司

定氮儀的工作原理及操作步驟

時(shí)間:2022-7-31閱讀:166
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定氮儀工作原理:

蛋白質(zhì)測(cè)定儀(俗稱(chēng)定氮儀)以國(guó)際凱氏定氮法為依據(jù),進(jìn)行設(shè)計(jì)制造的,此儀器主機(jī)采用蒸氣自動(dòng)控制發(fā)生器,在液位穩(wěn)壓器的配合下,使蒸氣在數(shù)十秒時(shí)間內(nèi)平穩(wěn)輸出供蒸餾器使用。

執(zhí)行機(jī)關(guān)控制下的堿液流經(jīng)蒸餾管進(jìn)入定量消化管,使固定在酸液里的氨在堿性條件下?lián)]發(fā)。

第二執(zhí)行機(jī)關(guān)控制下的蒸氣對(duì)堿性條件的試樣再進(jìn)行蒸餾,使氨*揮發(fā),揮發(fā)的氨被冷凝器冷凝下來(lái),*地被固定在硼酸之中,然后用標(biāo)準(zhǔn)酸對(duì)其滴定到終點(diǎn),計(jì)算出氮的含量,再乘以換算蛋白質(zhì)的系數(shù)得出蛋白質(zhì)的含量。

定氮儀操作步驟:

消化:

1.準(zhǔn)備6個(gè)燒瓶,加標(biāo)簽。在燒瓶1、2和3中加入1.0ml適當(dāng)濃度的蛋白質(zhì)溶液。將樣品添加到燒瓶底部,不要粘在瓶口和瓶頸上。然后,依次加入0.3g硫酸鉀-硫酸銅接觸劑,2.0ml濃硫酸和1.0ml 30%的過(guò)氧化氫。 4、5和6燒瓶用作空白對(duì)照,以確定試劑中的痕量氮含量并校正樣品測(cè)定。 向燒瓶4、5和6中加入1.0ml蒸餾水代替樣品溶液,其他所加試劑與燒瓶1、2和3相同。

2.將裝有試劑的燒瓶放在消化架上,然后連接抽氣裝置。首先,用小火煮沸,然后燒瓶的碳化變成黑色并產(chǎn)生大量氣泡。當(dāng)泡沫消失并停止時(shí),增加火力,使瓶中的液體稍微沸騰直到溶液澄清為止,然后繼續(xù)加熱以使消化液沸騰15分鐘。消化過(guò)程中,應(yīng)隨時(shí)旋轉(zhuǎn)燒瓶,以使內(nèi)壁內(nèi)的附著物質(zhì)流入底部,以確保樣品*消化。消化過(guò)程中釋放出的氣體中含有高度刺激性的SO2。因此,應(yīng)從頭到尾打開(kāi)泵,將氣體排放到自來(lái)水中。整個(gè)消化過(guò)程應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。消化后,關(guān)閉火焰,將燒瓶冷卻至室溫。

蒸餾吸收:

蒸餾和吸收在微型中進(jìn)行。凱氏定氮蒸餾設(shè)備有很多種,主要由產(chǎn)生蒸汽,氨蒸餾和吸收氨組成。

1.定氮儀儀器的洗滌

在安裝氮?dú)獗碇?,?yīng)按一般方法清洗和清潔所有零件。將使用的橡膠管和塞子浸入10%NaOH溶液中,煮沸約10分鐘,洗滌并煮沸10分鐘,然后洗滌數(shù)次,然后安裝并固定在鐵架平臺(tái)上。在使用該儀器之前,必須用水蒸氣清洗所有走線管,以除去可能殘留在管道中的氨。每次測(cè)量樣品前,可以將使用中的儀器清洗5分鐘。對(duì)于長(zhǎng)時(shí)間不使用的儀器,請(qǐng)重復(fù)蒸汽沖洗不少于3次,并檢查儀器是否正常。仔細(xì)檢查連接以確保沒(méi)有空氣泄漏。

首先,在蒸汽發(fā)生器中加入約2/3體積的蒸餾水,加幾滴硫酸使其保持酸性,以避免水中氨氣蒸發(fā)的影響,并加入少量沸石(或毛細(xì)管等)防爆沸騰。沿小玻璃杯的壁添加20ml蒸餾水,以使水通過(guò)插管流入反應(yīng)室,但切勿將玻璃杯中的水排干。塞上桿玻璃塞以保持水密封,以防止漏氣。發(fā)生蒸汽后,立即關(guān)閉廢液排放管上的開(kāi)關(guān),以使蒸汽只能進(jìn)入反應(yīng)室,這會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)室中的水迅速沸騰。從反應(yīng)器出來(lái)的蒸汽通過(guò)位于反應(yīng)室上部的氮?dú)夤潭ㄇ蜻M(jìn)入冷凝管,以進(jìn)行冷卻,并在冷凝管的下端放置一個(gè)錐形瓶以容納冷凝液。從設(shè)定的氮?dú)馇蜷_(kāi)始加熱的時(shí)間,連續(xù)煮5分鐘,然后取下煤氣燈。沖洗后,夾緊連接蒸汽發(fā)生器和集熱器的橡膠管。由于氣體冷卻壓力的降低,反應(yīng)室中的廢液將被自動(dòng)泵入反應(yīng)室的殼體中,并通過(guò)打開(kāi)廢液排出口夾將廢液排出。清洗2-3次后,將裝有硼酸指示劑混合物的錐形瓶置于冷凝器管下,以將冷凝水管的下端口*浸入溶液中,蒸餾1-2分鐘,并觀察溶液是否在錐形管中。瓶子變色了。如果沒(méi)有變色,則清潔蒸餾單元。取下錐形瓶,蒸餾1-2分鐘,用蒸餾水清洗冷凝器的下部端口,關(guān)閉煤氣燈,凱氏定氮儀可用于樣品測(cè)量。

2.無(wú)機(jī)氮標(biāo)準(zhǔn)樣品的蒸餾吸收

由于氮測(cè)定操作繁瑣,為了熟悉蒸餾和滴定的操作技術(shù),初學(xué)者應(yīng)首先使用無(wú)機(jī)氮標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行重復(fù)練習(xí),然后再測(cè)定未知的有機(jī)氮樣品。通常將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨測(cè)試3次。

取五個(gè)干凈的100ml錐形瓶,依次加入20ml 2%的硼酸溶液,3-4滴甲基紅混合指示劑(紫紅色),并蓋好瓶口以備使用。取一個(gè)錐形瓶放在冷凝管的下端,然后將冷凝管的出口浸入溶液中。

注意:在執(zhí)行此操作之前,必須打開(kāi)收集器的活塞,以防止錐形瓶中的液體被吸回。準(zhǔn)確地將2ml硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液吸到玻璃杯中,小心地提起棒形玻璃塞,使硫酸銨溶液緩慢流入蒸餾瓶中,用少量蒸餾水清洗小玻璃杯三遍,然后放入將其倒入蒸餾瓶中。然后,在帶有量筒的小玻璃杯中加入10ml 30%NaOH溶液,使堿液緩慢流入蒸餾瓶中。當(dāng)堿液尚未*流入時(shí),關(guān)閉玻璃棒塞子。向小玻璃杯中加入約5ml蒸餾水,然后慢慢打開(kāi)玻璃塞,使一半的水流入蒸餾瓶,一半的水留在小玻璃杯中以進(jìn)行水封。關(guān)閉收集器的活塞并加熱蒸汽發(fā)生器以進(jìn)行蒸餾。由于氨的吸收,圓錐形燒瓶中的硼酸和指示劑的混合物從紫紅色變?yōu)榫G色。從變色的時(shí)間開(kāi)始,再蒸餾3-5分鐘,移動(dòng)錐形燒瓶,使燒瓶中的液位離開(kāi)冷凝器管的下部開(kāi)口約LCM,用少量的水沖洗冷凝器管的下部開(kāi)口蒸餾水,再繼續(xù)蒸餾1分鐘,取出錐形瓶,蓋上蓋子,準(zhǔn)備滴定。初餾后,取下氣體燈,將橡膠管夾在蒸汽發(fā)生器和收集器之間,反應(yīng)后除去廢液,用水沖洗小玻璃杯數(shù)次,然后除去廢液。重復(fù)洗滌后,可以蒸餾下一個(gè)樣品。根據(jù)上述方法,用標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨進(jìn)行兩次。再用2ml蒸餾水代替標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨兩次以進(jìn)行空白測(cè)定。在錐形燒瓶中滴定每次蒸餾的溶液。

3.未知樣品和空白樣品的蒸餾吸收

將三個(gè)消化的蛋白質(zhì)樣品和三個(gè)空白對(duì)照溶液依次蒸餾并吸收。向消化后的樣品或空白對(duì)照溶液中加入5ml熱蒸餾水,通過(guò)一個(gè)小玻璃杯將其加入反應(yīng)室,然后用熱蒸餾水將小玻璃杯洗滌3次,每次約3ml,然后將洗滌液倒入反應(yīng)室。其他操作根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)硫酸銨的蒸餾進(jìn)行。由于消化液中硫酸鉀的濃度很高,因此不容易從凱氏定氮瓶中倒出。必須添加5毫升熱蒸餾水以將其稀釋。如果有結(jié)晶,則必須稍微溶解。變熱時(shí),添加玻璃杯以使其流入反應(yīng)室。此外,應(yīng)注意的是,在清洗后儀器未*冷卻時(shí),應(yīng)立即添加樣品或空白對(duì)照溶液,否則消化液容易通過(guò)冷卻管沉淀和結(jié)晶,從而造成堵塞。

滴定:

蒸餾后將樣品和空白一起滴定。打開(kāi)接收瓶蓋,并用酸微滴定管滴定0.0100mol / l標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液。當(dāng)溶液為深灰色時(shí),用蒸餾水沖洗錐形瓶的內(nèi)壁一次。如果搖動(dòng)后仍變綠,請(qǐng)小心滴下另一滴標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液。搖動(dòng)并觀察瓶中溶液的顏色變化。如果深灰色在一兩分鐘內(nèi)沒(méi)有變化,則認(rèn)為已到達(dá)滴定終點(diǎn)。如果是粉紅色,則表明已經(jīng)超過(guò)了滴定終點(diǎn),可以從滴定消耗的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液量中減去0.02ml,并且每組樣品的氮測(cè)定終點(diǎn)的顏色必須*一致。空白對(duì)照溶液的接收瓶中溶液的顏色不變或略有變化,綠色尚未出現(xiàn),因此無(wú)法滴定。記錄每次滴定中消耗的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液的毫升數(shù),以進(jìn)行計(jì)算。 



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