品牌：福際
高效的去gDNA能力，能在2min內(nèi)去除模板中的gDNA。
高效的逆轉錄體系，只需15min即可完成第1鏈cDNA的合成。
復雜模板：GC含量較高和二級結構復雜模板亦能得到很高效率的逆轉。
高靈敏的逆轉錄體系，pg級別的模板也可以得到高質(zhì)量的cDNA。
逆轉錄體系熱穩(wěn)定性高，*適反應溫度為42℃，在50℃仍具有良好的逆轉錄性能。

詳細介紹

產(chǎn) 品名稱	去基因組第1鏈cDNA合成預混體系Master Premix(For qPCR) RT Easy^TM II(With gDNase)
貨號	RT-01031	RT-01032
規(guī) 格	25 × 20 μL rxns	100 × 20 μL rxns
價格	￥427.00	￥1,284.00
描述	本產(chǎn)品是專門為Real Time PCR研制的快速去除基因組DNA污染的逆轉錄體系。 5× gDNase Mix能在42°C，2min快速去除RNA中殘留的基因組，有效的避免了基因組對qPCR結果的干擾。

產(chǎn)品介紹

RT Easy^TMII(With gDNase)是專門為Real Time PCR研制的快速去除基因組DNA污染的逆轉錄體系。5×gDNase Mix能在42°C，2min快速去除RNA中殘留的基因組，有效的避免了基因組對qPCR結果的干擾。

5× RO-Easy^TM Mix內(nèi)含福際專門研制的Foregene Reverse Transcriptase，是一款新型反轉錄酶，具有更強的RNA親和性。優(yōu)化后的體系使得逆轉錄速率更快，42°C，15min即可完成第1鏈cDNA的合成。

該試劑盒的逆轉錄體系在50°C條件下逆轉錄酶也能保持良好的活性，因此對于復雜的RNA模板更優(yōu)勢，能輕松的轉錄GC含量高、二級結構復雜的RNA模板。

試劑盒應用

v 直接用于RealTime PCR定量分析基因的表達。

v 可以快速、準確地對RNA病毒等微量RNA進行分析。

v 高GC含量或具有復雜二級結構RNA模板的逆轉錄。

儲存條件

試劑盒保存于-20℃。產(chǎn)品收到后立即存放于-20℃恒溫冰箱中。如果存儲條件適當，產(chǎn)品在1年有效期內(nèi)不會降低任何性能。

劑盒內(nèi)容

5× gDNase Mix：gDNA去除劑，在進行RT反應前務必按照操作說明使用該試劑(內(nèi)部甘油含量較高，-20℃以上可能不會結冰，屬于正?，F(xiàn)象)。

5× RO-Easy^TMMix：包含福際生物專門研制的Foregene Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、dNTPs、穩(wěn)定劑、增強劑、優(yōu)化劑及優(yōu)化配比的逆轉錄引物(Random Primer、Oligo(dT)₁₈Primer)。

Foregene Reverse Transcriptase

Foregene逆轉錄酶能夠提供高效、特異性強的逆轉錄反應。逆轉錄酶表現(xiàn)出很高的親和力，并在 50°C反應溫度條件下仍然保持良好的逆轉錄活性，能夠很好的逆轉錄其他逆轉錄酶不能處理的二級結構復雜的RNA。Foregene Reverse Transcriptase 靈敏度高，使用的RNA 量范圍廣泛(0.1pg≤RNA≤1μg) 。

RT Mix耐受性

經(jīng)測試分析，2× RT OR-Easy^TM Mix對酒精和胍鹽顯示出很高的耐受性。實驗室純化獲得的RNA常有酒精及胍鹽殘留，對逆轉錄有很強的抑制性，導致逆轉錄效果不理想或逆轉錄效率低。Foregene RT Easy系列產(chǎn)品對酒精及胍鹽的耐受能力使得逆轉錄更容易、高效率的進行。

酒精耐受性分析

胍鹽耐受性分析

RNA模板濃度

(0.1pg-1μg total RNAor 0.01pg-0.1μg mRNA) /20 μL體系。

非特異性擴增
Answer
1. 引物設計不合理
建議：按照引物設計原則進行引物的設計。
2. 基因組殘留。
建議：確定第1步gDNA去除反應溫度為42°C，也可延長反應時間至5min。
RT-QPCR無擴增信號
Answer
1. RNA被降解。
建議：提取RNA的材料盡量新鮮，應用高質(zhì)量高純的的RNA。
2. RNA含有抑制劑。
建議：逆轉錄抑制劑一般包括SDS、胍鹽、EDTA等，建議通過70%的乙醇對RNA沉淀進行清洗，除去抑制劑。
3. 引物設計問題。
建議：按照引物設計原則，重新設計引物進行檢查。
空白對照出現(xiàn)目的條帶
Answer
1. 操作工具或試劑污染。
建議：實驗所有試劑或器材均應高壓滅菌。操作時應小心輕柔，防止將DNA樣品吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外。
2. PCR反應體系制備時發(fā)生污染。
建議：操作時進行必要的防護措施，比如：戴乳膠手套，使用帶濾芯的槍頭。使用防污染體系的real time PCR Mix。
3. 引物出現(xiàn)降解。
建議：使用SDS-PAGE電泳檢測引物是否發(fā)生降解，更換新的引物進行熒光檢測實驗。