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*檢測試劑盒

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產(chǎn)品型號CFC030D

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更新時間：2016-03-17 02:00:59瀏覽次數(shù)：400次

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蘇州艾瑞德生物科技有限公司

經(jīng)營模式：生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品：66條

所在地區(qū)：江蘇蘇州市

聯(lián)系人：盛經(jīng)理（主管）

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產(chǎn)品簡介

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物*與微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭其抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含*的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出殘留物*的含量。

詳細(xì)介紹

【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】
規(guī)      格：96孔/盒
靈敏度： 1ppb
檢測時間： 80min
樣本檢測下限：
雞肉 / 肝、豬肉 / 肝、雞蛋、蜂蜜 ……………… 1 p pb
血清、尿液…………………………………………4ppb
牛          奶 ………………………………………… 2 0 ppb
樣本回收率
雞肉/ 肝、豬肉 / 肝…………………………90% ±10%
雞        蛋   ……………………………………65% ±10%
蜂蜜、牛奶、血清 …………………………70% ±10%
試劑盒組成
1、微量測試孔：每條8孔，一板12條
2、標(biāo) 準(zhǔn) 液×6瓶：（1ml/瓶） 0ppb、 1ppb、3ppb、9ppb、 27ppb、 81ppb
3、酶標(biāo)記物   7ml ……………………………… 紅色帽
4、抗體工作液 10ml …………………………… 藍(lán)色帽
5、底物A液    7ml ………………………………白色帽
6、底物B液　7 ml………………………………黑色帽
7、終止液        7 ml ………………………………黃色帽
8、20X濃縮洗滌液40 ml………………………白色帽
     2X濃縮復(fù)溶液 50 ml……………透明帽
【所用儀器、試劑】
具備的儀器：微孔酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：單道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道250µl
試       劑：乙酸乙酯、NaH2PO4•2H2O、Na2HPO4•12H2O、正己烷
【樣本前處理步驟】
樣本前處理須知
處理任何樣本時，都必須注意：
（a）本試劑盒所檢測的組織樣本包括：動物組織、禽類和水產(chǎn)組織。eg:雞、鴨、牛、兔、魚、蝦等。
（b）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（c）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
樣本處理前需配制：
處理任何樣本時，都必須注意：
（a）本試劑盒所檢測的組織樣本包括：動物組織、禽類和水產(chǎn)組織。eg:雞、鴨、牛、兔、魚、蝦等。
（b）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（c）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
樣本前處理需配制：
配液1、0.02MPB緩沖液
            稱取2.58g Na2HPO4•12H2O和0.44g NaH2PO4•2H2O加去離子水500ml溶解。
配液2、樣本復(fù)溶液：
           將2×濃縮復(fù)溶液用去離子水以1：1?。?份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水），用于樣本提取后的復(fù)溶。
（a ）動物組織（肌肉、肝臟等）、雞蛋、蝦、魚等
1、稱取2±0.05g組織樣本于離心管中，加入6ml乙酸乙酯，充分混勻5min，于15℃，4000r/min以上速度離心10min；
2、移取3ml上清液至干凈的玻璃管中，于50℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?br /> 3、加入已稀釋好的復(fù)溶液1ml混勻，再用正己烷1ml混合30s。室溫4000r/min，離心5min，除去上層液；
4、取20µl下層用于分析。
      樣本稀釋倍數(shù)：1
注：在使用國家規(guī)定zui高殘留*（100ppb）進(jìn)行判定時，需進(jìn)行5倍稀釋（1份樣本液+4份已稀釋好的復(fù)溶液）。
4、取20µl下層用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：1倍
注：在使用國家規(guī)定zui高殘留*（100ppb）進(jìn)行判定時，需進(jìn)行5倍稀釋（1份樣本液+4份已稀釋好的復(fù)溶液）。
（b）血清樣本
1、將血樣本于室溫放置30min，于10℃，4000r/min以上離心10min，分離出血清或過濾血清；
2、取1ml血清，加入3ml 0.02 M PB緩沖液混合，混合30s；
3、取20µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：4倍　　
（c）蜂蜜
1、稱取1±0.05g蜂蜜樣本于50ml離心管中，加入2ml 0.02MPB緩沖液溶解；
2、加入8ml乙酸乙脂振蕩5min，4000r/min以上室溫離心10min；
3、取4ml上層液體于50℃下氮?dú)獯蹈桑?.5ml 已稀釋好的復(fù)溶液復(fù)溶，混合30s；
4、取20µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：1倍
（d）尿液
1、用3ml0.02 M PB緩沖液與1ml經(jīng)離心后的清亮尿樣本混合，混合30s；
2、取20µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：4倍　　　
（e）牛奶
1、取1ml牛奶樣本用0.02 M PB緩沖液按1︰19（v/v）稀釋（即20µl牛奶+380µl 0.02 M PB緩沖液），混合30s；
2、取20µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：20倍
【酶標(biāo)免疫分析程序】
測定前應(yīng)須知：
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。
2、使用之后立即將所有試劑放回2-8℃環(huán)境。
3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的*性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點(diǎn)。
4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、按板架及需要取出微孔條，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
4、編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本20µl /孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入80µl /孔的抗體工作液，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環(huán)境中反應(yīng)60min 。
6、取出酶標(biāo)板甩出孔內(nèi)液體后用洗滌液按每孔250µl，洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
7、顯色：每孔加入A液50µl，再加B液50µl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色20min。
8、測定：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測,在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定吸光度值（OD值）。
【結(jié)果判定】
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與磺胺類藥物的含量成負(fù)相關(guān)。
1、粗略判定
      用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍（ng /ml）。假設(shè)樣本1的吸光度值0.211，樣本2的吸光度值為0.785，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為2.140；1ppb為1.560；3ppb為1.124；9ppb為0.650； 27ppb為0.328；81ppb為0.125。則樣本1的濃度范圍是27ppb-81ppb；樣本2的濃度范圍是3ppb-9ppb。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中*實(shí)際含量。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以*個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以*，即：
百分吸光度值（%）＝ B ×*

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以*濃度（ng /ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中*實(shí)際含量。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（索?。?br /> 3、標(biāo)準(zhǔn)曲線：
B/B0 （%）

       1            3           9            27            81
                      （ppb） [µg/kg]
     圖1：*檢測試劑盒的回歸曲線

4、再現(xiàn)性：
    %CV

         0        1        3       9       27       81
                          （ppb） [µg/kg]
        圖2：*檢測試劑盒的精密度
由多個不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應(yīng)*濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項(xiàng)】
1、使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒有回到室溫（20-25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位（A450nm<0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8、該試劑盒*反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲存】
原包裝應(yīng)儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號見外包裝。