肽和雙縮脲反應(yīng)

基于銅的蛋白的檢測(cè)，包括BCA和洛瑞方法，取決于上的公知的“縮二脲反應(yīng)”，由此含有三個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基的肽形成一個(gè)著色螯合物配合物與二價(jià)銅離子（Cu2 +的）中的堿性環(huán)境中含有鈉酒石酸鉀。這成為雙縮脲反應(yīng)為已知的，因?yàn)樗且粋€(gè)復(fù)雜的化學(xué)性質(zhì)相似的形式與有機(jī)化合物的縮二脲（NH 2-CO-NH-CO-NH 2）和二價(jià)銅離子。 過剩的脲和熱的產(chǎn)物，縮二脲，與銅的反應(yīng)以形成光的藍(lán)色的四配位配合物。

圖雙縮脲反應(yīng)。通過減少銅亞銅形式的銅離子，反應(yīng)產(chǎn)生一種淡淡的藍(lán)紫色。
 結(jié)構(gòu)的尿素，縮二脲和肽。由于多肽具有相似的結(jié)構(gòu)，以縮二脲，它們是能夠由縮二脲反應(yīng)與銅的絡(luò)合物。
單氨基酸和二肽不給雙縮脲反應(yīng)，但三肽和多肽或蛋白質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，生成藍(lán)紫色絡(luò)合物，在540nm處吸收光的光。一個(gè)銅離子形成配位絡(luò)合物，四到六附近肽債券的著色。產(chǎn)生的顏色的強(qiáng)度是參與反應(yīng)的肽鍵的數(shù)目成正比。因此，雙縮脲反應(yīng)，是一個(gè)簡單的和快速的相同名稱的用于定量測(cè)定總蛋白濃度的比色試劑的基礎(chǔ)。的縮二脲測(cè)定的工作范圍是5-160mg/mL，這對(duì)于某些類型的工業(yè)應(yīng)用是足夠的，但幾乎沒有足夠敏感的大部分蛋白質(zhì)的研究需要。