• 純化得到的DNA內(nèi)毒素水平低于0.1 EU/µg

• 純化流程快，同時去除內(nèi)毒素

• 獲得高產(chǎn)量、高拷貝質(zhì)粒DNA

• 使用LyseBlue，獲得的裂解和高產(chǎn)量的DNA

EndoFree Plasmid Kits基于陰離子交換技術(shù)，可快速制備不含內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA。QIAfilter Cartridges過濾快速澄清裂解液，DNA的產(chǎn)量500 μg（Maxi）、2.5 mg（Mega）和10 mg（Giga）。制備的DNA 純度超過兩次CsCl梯度離心法所得DNA的純度，適合超轉(zhuǎn)染級純的應(yīng)用。

純化的質(zhì)粒DNA內(nèi)毒素污染水平取決于所用的純化方法（參見"Endotoxin levels in plasmid preparations"）。硅膠技術(shù)純化的DNA具有非常高的內(nèi)毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和兩次CsCl超速離心可獲得相對低水平內(nèi)毒素的純DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的內(nèi)毒素去除步驟，獲得<0.1 EU/µg的質(zhì)粒DNA。

QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊設(shè)計的過濾裝置，用于代替細菌細胞堿裂解后的離心步驟。QIAfilter Cartridges可wanquan去除SDS沉淀，清除細菌裂解液，相比離心可大量節(jié)約時間，減少1小時的質(zhì)粒純化時間。QIAfilter Mega-Giga Cartridges采用內(nèi)部真空方式輕松高效的清除大量細菌裂解液（注意：該試劑盒不包含瓶子）。

QIAGEN-tips中dute的陰離子交換樹脂（不提供EndoFree Plasmid Buffer Set）專為核酸純化而開發(fā)。它的分離性能使得DNA純度與連續(xù)兩次CsCl梯度離心獲得的DNA純度相當(dāng)。由重力流驅(qū)動并持續(xù)運轉(zhuǎn)的預(yù)裝 QIAGEN-tips，限度減少手動制備質(zhì)粒所需的時間。整個QIAGEN質(zhì)粒純化系統(tǒng)不使用有毒物質(zhì)，如benfen，氯仿，溴化乙錠和CsCl，限 度地減少對用戶和環(huán)境的危害。

內(nèi)毒素，又稱脂多糖或LPS，是大腸桿菌等革蘭氏陰性菌細胞膜的組成部分，如大腸桿菌（參見Bacterial cell wall）。 內(nèi)毒素在質(zhì)粒裂解純化過程中釋放出來，并顯著降低內(nèi)毒素敏感細胞株的轉(zhuǎn)染效率。此外，內(nèi)毒素與DNA競爭“自由"轉(zhuǎn)染試劑，影響轉(zhuǎn)染實驗中質(zhì)粒DNA的攝 取。內(nèi)毒素也誘導(dǎo)巨噬細胞和B細胞等免疫細胞發(fā)生非特異性免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)染結(jié)果的誤讀。這些反應(yīng)包括誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)和脂類，如IL-1和前列腺素等的 合成?？傮w而言，內(nèi)毒素在轉(zhuǎn)染實驗中是不可控變量，影響結(jié)果的可重復(fù)性，使它們難以對比、解讀。在基因治療研究中，內(nèi)毒素可造成內(nèi)毒素休克綜合癥和激活補 體級聯(lián)，干擾研究。

在堿性條件下，細菌細胞裂解，使用QIAfilter Mega-Giga Cartridge清除粗裂解物。將Endotoxin Removal Buffer加入到過濾后的裂解液中。冰浴后，將純凈的裂解物上樣到陰離子交換柱上，在適當(dāng)?shù)牡望}和pH條件下，質(zhì)粒DNA選擇性結(jié)合。用中鹽緩沖液清除 RNA、蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物和其他低分子量雜質(zhì)，超純質(zhì)粒DNA被高鹽緩沖液洗脫（參見QIAGEN Plasmid Kit procedures）。最后DNA由異丙醇脫鹽、沉淀并且離心回收。

使用EndoFree Plasmid Kits純化的DNA適合多種敏感應(yīng)用，包括：

• 轉(zhuǎn)染，包括原代、敏感以及懸浮細胞

• 基因治療研究

• 基因沉默

• 顯微注射