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RNeasy Mini Kit (250)凱杰Qiagen試劑盒

RNeasy Mini Kit可從細(xì)胞、組織或酵母中快速純化高品質(zhì)RNA，硅膠膜RNeasy離心柱的結(jié)合能力達(dá)100 μg RNA。使用RNAlater RNA Stabilization Reagent或Allprotect Tissue Reagent可方便的穩(wěn)定組織樣本，使用TissueRuptor或TissueLyser體系可有效的破碎組織?？稍赒IAcube全自動核酸純化儀上應(yīng)用RNeasy Mini Kit實(shí)現(xiàn)RNA純化自動化。處理更小或更大的樣本，可使用RNeasy Micro Kit（離心柱結(jié)合能力為45 µg RNA）、RNeasy Midi Kit（離心柱結(jié)合能力為1 mg RNA）和RNeasy Maxi Kit（離心柱結(jié)合能力為6 mg RNA）。

RNeasy Mini實(shí)驗(yàn)方案。

使用RNeasy Mini Kit純化的總RNA具有高質(zhì)量，適用于多種下游操作。實(shí)驗(yàn)方案還包括部分純化的RNA、體外轉(zhuǎn)錄本和酶反應(yīng)RNA的回收。不提供溶壁酶、酵母裂解酶或玻璃珠（酵母樣本需要）。因樣本來源的發(fā)育階段、種屬和生長條件的不同，從樣本中分離的RNA量也各異。由于RNA酶步驟富集的RNA種屬>200 nt，因此RNA產(chǎn)量不包括5S rRNA、tRNA或其他低分子量RNA。

從多種樣本中純化高品質(zhì)RNA。

使用RNeasy Maxi Kit純化的總RNA的甲醛瓊脂糖凝膠電泳和northern印跡。從各種來源的樣本中分離總RNA（10 µg）上樣至各泳道。所有組織均來源于小鼠。酵母：Saccharomyces cerevisiae；E. coli菌株：HB101。32P標(biāo)記的探針識別的（G）GAPDH；（E）翻譯延長因子EF-1α；和（O）外膜蛋白A序列。（E和O分別由瑞士巴塞爾大學(xué)的P. Philippsen和德國蒂賓根馬克斯-普朗克生物學(xué)研究所的U. Henning提供。）B. subtilis未采用探針檢測。M：0.24–9.5 kb RNA分子量標(biāo)準(zhǔn)。胚胎、Huh7和HeLa細(xì)胞泳道中的7.5 kb條帶（圖示）為核前體RNA。

對少至100個細(xì)胞的RNA進(jìn)行RT-PCR。

使用RNeasy Mini Kit從圖示數(shù)目的HeLa細(xì)胞中分離的總RNA的RT-PCR。使用不含RNA酶的DNA酶酶切10 µl（1/5）洗脫液，并使用oligo-dT引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。使用2.5 µl（1/20）的cDNA混合物進(jìn)行50 µl PCR。擴(kuò)增452 bp的GAPDH片段。C-：陰性對照；C+：陽性對照；M：100 bp分子量標(biāo)準(zhǔn)。

RNeasy Mini離心柱。

RNeasy Mini Kit中提供RNeasy Mini離心柱。

RNeasy Mini Kit (250)凱杰Qiagen試劑盒

性能

RNeasy Mini Kit可從至多30 mg動物或人類組織樣本，或從100–1 x 10⁷個動物或人類細(xì)胞樣本或酵母中純化總RNA。

RNeasy Mini Kit純化得到的總RNA產(chǎn)量

樣本來源	起始材料	平均產(chǎn)量（µg）
動物細(xì)胞 LMH HeLa COS-7 淋巴細(xì)胞（未受激）	1 x 10⁶1 x 10⁶1 x 10⁶1 x 10⁶	12 15 35 0.5
小鼠組織肝肺脾	10 mg 10 mg 10 mg	40 10 35
真菌細(xì)胞 S. cerevisiae	1 x 10⁷	25

原理

RNeasy Mini Kit可從少量的樣本中高效純化總RNA。RNeasy純化技術(shù)整合了ben酚/異硫氰酸胍裂解的嚴(yán)謹(jǐn)性和硅膠膜純化的速度和純度，簡化了總RNA純化技術(shù)。純化得到高品質(zhì)的RNA，并且DNA殘留水平達(dá)到zui低。

操作流程

RNeasy Mini Kit可從10–1 x 10⁷個動物或人類細(xì)胞中、0.5–30 mg動物或人類組織中或小于5 x 10⁷個酵母細(xì)胞中方便的純化總RNA。先對樣本進(jìn)行破碎和勻漿。在裂解物中加入乙醇以提供合適的結(jié)合條件。然后將裂解物上樣至RNeasy硅膠膜。RNA結(jié)合到膜上（最多可結(jié)合100 µg），污染物被高效洗去。對于某些對少量DNA十分敏感的RNA應(yīng)用，可在RNeasy操作過程中進(jìn)行柱上DNA酶處理，去除DNA殘留。之后可在30–100 µl的純水洗脫液中得到高濃度的純化RNA。還有各種特殊應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)方案可供選擇。

應(yīng)用

使用RNeasy技術(shù)純化得到的RNA的A_260/280比為1.9–2.1（10 mM Tris-·Cl、pH 7.5的溶液中），適用于多種下游應(yīng)用，包括：

Northern印跡、點(diǎn)印跡和狹縫印跡

終點(diǎn)式RT-PCR

定量real-time RT-PCR

芯片分析

Poly A+ RNA篩選

特點(diǎn)	參數(shù)
Applications	PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
Elution volume	30–100 µl
Format	Spin column
Main sample type	Tissue, cells
Processing	Manual (centrifugation)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein	Total RNA
Sample amount	0.5–30 mg
Technology	Silica technology
Time per run or per prep	20 minutes
Yield	Varies