Pierce™ 經(jīng)典磁珠法 IP/Co-IP 試劑盒

Thermo Scientific Pierce 經(jīng)典磁珠法 IP/Co-IP 試劑盒使用不到 10 µg 的抗體和磁性分離器可高度有效且高效地對(duì)抗原和蛋白復(fù)合物進(jìn)行免疫沉淀 (IP) 和免疫共沉淀 (co-IP)。

經(jīng)典磁珠法 IP/Co-IP 試劑盒的特點(diǎn)：

•兼容—基于蛋白 A/G 重組蛋白的磁珠可確保與大多數(shù)一抗（無(wú)論來(lái)自小鼠還是兔）兼容
• 快速—免疫沉淀短至 30 分鐘，以降低背景并提高瞬時(shí)蛋白復(fù)合物的捕獲水平
• 潔凈—固定您的抗體，以防止洗脫液受到污染
• 耐受性—在存在去污劑、低 pH 值緩沖液或常見(jiàn)質(zhì)譜溶劑的情況下，不會(huì)浸出蛋白 A/G
• 高效—與其他磁珠相比，使用一半推薦體積的磁粒子進(jìn)行免疫沉淀
• 便利—綜合 Co-IP 試劑盒包含磁珠和完整免疫沉淀實(shí)驗(yàn)所需的所有必要緩沖液

本免疫沉淀試劑盒使用高質(zhì)量 Thermo Scientific Pierce 蛋白 A/G 磁珠以及優(yōu)化的緩沖液和靈活的實(shí)驗(yàn)方案以獲得高得率 IP 或 co-IP，其可使用手動(dòng)或自動(dòng)磁性分離工具。優(yōu)化的裂解/洗滌緩沖液優(yōu)化了抗體-抗原的得率和高效結(jié)合以及 co-IP 相互作用。相對(duì)溫和的低 pH 值洗脫緩沖液可使結(jié)合的免疫復(fù)合物與蛋白 A/G 分離。或者，內(nèi)含的泳道標(biāo)志物樣品緩沖液提供了快速的變性洗脫，用于 IP 產(chǎn)物的直接 SDS-PAGE 分析。

包括：
Pierce 蛋白 A/G 磁珠、裂解/洗滌緩沖液、洗脫緩沖液、中和緩沖液及上樣緩沖液

使用磁粒子進(jìn)行免疫沉淀與微珠狀瓊脂糖 IP 非常相似，只是使用磁鐵而非通過(guò)離心進(jìn)行分離。首先將特異性抗體加入到樣品中，形成一種免疫復(fù)合物，然后與磁珠結(jié)合。洗滌復(fù)合物以去除未結(jié)合的材料，低 pH 值洗脫緩沖液可使結(jié)合的免疫復(fù)合物與蛋白 A/G 分離?；蛘?，包括泳道標(biāo)志物樣品緩沖液，用于使用變性條件進(jìn)行解離或者用于 SDS-PAGE 分析的下游樣品制備。該試劑盒包含 Thermo Scientific Pierce 蛋白 A/G 磁珠（用于快速方便地對(duì)抗原進(jìn)行磁性分離）以及優(yōu)化的緩沖液（用于提高抗原得率）。使用磁力架手動(dòng)從溶液中取出磁珠或者使用 Thermo Scientific KingFisher Flex 儀器等儀器通過(guò)自動(dòng)化操作從溶液中取出磁珠。

通常已知更長(zhǎng)時(shí)間的抗體-樣品孵育（2 小時(shí)到過(guò)夜）通常在 IP 測(cè)定中具有更高的得率。人們通常認(rèn)為這種更高的得率與增加的背景有關(guān)。我們的研究人員發(fā)現(xiàn)過(guò)夜抗體-樣品結(jié)合然后使用 Pierce 經(jīng)典磁珠法 IP/Co-IP 試劑盒進(jìn)行免疫沉淀，通常會(huì)提高得率，但不會(huì)增加背景。因此，我們建議研究人員盡可能在至少 1 個(gè)小時(shí)內(nèi)執(zhí)行該結(jié)合步驟。

方案總結(jié)：
• 將細(xì)胞裂解物與 IP 抗體在室溫下孵育 1 至 2 小時(shí)或在 4oC 下過(guò)夜孵育。
• 使抗原-抗體復(fù)合物與蛋白 A/G 磁珠在室溫下結(jié)合 1 小時(shí)。
•使用 IP 裂解/洗滌緩沖液洗滌微珠兩次，并用純化水洗滌一次。
•洗脫抗原/抗體復(fù)合物。

Pierce™ 經(jīng)典磁珠法 IP/Co-IP 試劑盒