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上海金穗生物科技有限公司

葡萄球菌病微生物學(xué)檢驗(yàn)診斷技術(shù)

時(shí)間:2012-10-20閱讀:818
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  1.標(biāo)本采集

根據(jù)病種不同,可采集膿液、創(chuàng)傷分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、腦脊液、糞便。
    2.檢驗(yàn)方法
(1)直接鏡檢  無菌取膿液、痰、滲出物及腦脊液(離心后取沉渣)涂片,經(jīng)革蘭染色后鏡檢,發(fā)現(xiàn)革蘭陽性呈葡萄狀排列的球菌,應(yīng)及時(shí)向臨床初步報(bào)告“查見革蘭陽性葡萄狀排列球菌,疑為葡萄球菌”,并進(jìn)一步分離培養(yǎng)和證實(shí)。
    (2)分離培養(yǎng)  血標(biāo)本(約5ml靜脈血)注入50ral葡萄糖肉湯*,迅速搖勻,以防凝固,37~C過夜,若均勻渾濁則轉(zhuǎn)種血平板進(jìn)一步鑒定,若無細(xì)菌生長(zhǎng),需連續(xù)觀察7天,并以血平板確定有無細(xì)菌生長(zhǎng)。
    膿液、尿道分泌物、腦脊液沉淀物可直接接種血平板,37~C過夜,可形成直徑約2~3mm、產(chǎn)生不同色素的菌落。*在菌落周圍有透明(口—)溶血環(huán)。
    尿標(biāo)本,必要時(shí)作細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)。
    糞便、嘔吐物應(yīng)接種高鹽*平板,37~C過夜可形成淡黃色菌落。
    (3)鑒定試驗(yàn)
    ①血漿凝固酶試驗(yàn)。有玻片法和試管法,前者測(cè)結(jié)合型凝固酶,后者測(cè)游離型凝固酶,以EDTA抗凝兔血漿為。玻片法即刻血漿凝固為陽性;試管法以37~C水浴3—4h后凝固為陽性,24h不凝固為陰性。
    ②*發(fā)酵試驗(yàn)。*可發(fā)酵*。
    ③耐熱核酸酶試驗(yàn)。用于檢測(cè)*產(chǎn)生的耐熱核酸酶。將被檢菌的過夜培養(yǎng)肉湯沸水浴15min后滴加于甲苯胺藍(lán)核酸瓊脂上已打好的直徑為2—5mm的孔內(nèi),置37℃孵育3l環(huán)繞孔周的藍(lán)色瓊脂變?yōu)榉奂t色為陽性,同時(shí)應(yīng)設(shè)陰性、陽性對(duì)照。
    ④腸毒素測(cè)定。取食物中毒病人的嘔吐物、糞便或剩余食物接種于高鹽肉湯中,37℃ 24h培養(yǎng)后再分離純菌種,培養(yǎng)48h,將肉湯煮沸30min,殺死細(xì)菌及其他毒素,經(jīng)3000r/min離心1h后,取上清液2ml注人體重為500g左右幼貓腹腔,于4h內(nèi)發(fā)生嘔吐、腹瀉、體溫升高或死亡等現(xiàn)象者,提示有腸毒素存在的可能。
    ⑤SPA的檢測(cè)。SPA能與兔抗羊紅細(xì)胞血清中的IgG的FC段結(jié)合,使致敏羊紅細(xì)胞發(fā)生凝集,A蛋白的存在是*的特征。
    根據(jù)上述的試驗(yàn),如基本符合致病性葡萄球菌的鑒定依據(jù),可報(bào)告:“有*生長(zhǎng)”。
    近年來,凝固酶陰性葡萄球菌(coagulasemegativestaphylococci,CNS)成為醫(yī)院感染的重要病原菌,是創(chuàng)傷、尿道、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染和敗血癥的常見病原菌,而且耐藥菌株比*更為多見,現(xiàn)已日益受到重視。

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