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葡聚糖凝膠分離的目的在于“分子量”
點擊次數(shù)：1174 發(fā)布時間：2014-6-9
摘要：葡聚糖凝膠常用凝膠濾過法的目的在于達到分離，它在制備的過程中會遇到的問題及如何解決一下問題，下面詳細介紹。
*、葡聚糖凝膠常用的方法：
多糖的分子量測定常用的是凝膠濾過法。對于黏度大的多糖，可采用黏度法求得。亦有用蒸汽壓滲透法。
原理：SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，是在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中引進SDS， SDS能斷裂分子內(nèi)和分子間氫鍵，破壞蛋白質(zhì)的二級和三級結(jié)構(gòu)，強還原劑能使半*之間的二硫鍵斷裂，蛋白質(zhì)在一定濃度的含有強還原劑的SDS溶液中，與SDS分子按比例結(jié)合，形成帶負電荷的SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，這種復(fù)合物由于結(jié)合大量的SDS，使蛋白質(zhì)喪失了原有的電荷狀態(tài)形成僅保持原有分子大小為特征的負離子團塊，從而降低或消除了各種蛋白質(zhì)分子之間天然的電荷差異，由于SDS與蛋白質(zhì)的結(jié)合是按重量成比例的，因此在進行電泳時，蛋白質(zhì)分子的遷移速度取決于分子大小。
第二、葡聚糖凝膠測定糖分子量不同觀察角度
利用不同方法測定多糖分子量可以從不同角度對多糖分子量進行確證，同時也是對多糖純度的考察。在測定過程中要注意標準品的選擇，盡量使用與被測多糖結(jié)構(gòu)相似的標準品，因為不同結(jié)構(gòu)的標準品雖然其分子量相同而在一定條件下所表現(xiàn)的分子量會有所不同。多糖分子量的測定沒有一種的方法，其分子量只代表相似鏈長的平均配比而不是確切的分子大小。往往用不同的方法會得到不同的分子量。
第三、葡聚糖凝膠制備過程
制備過程編輯葡聚糖凝膠微珠表面形態(tài)存在粒子凝集和表面粗糙兩種不良情況。粒子凝集的原因是分散劑聚醋酸乙烯酯(PVAc)在堿性條件下水解導(dǎo)致親水性增強，以及交聯(lián)反應(yīng)的中間產(chǎn)物具有絮凝作用。另外，交聯(lián)后粒子粘度增大也可導(dǎo)致凝集。葡聚糖微珠表面粗糙是由于后處理時PVAc的微小附著物沒有從微珠表面*除去而造成的。作者采取低溫分散、交聯(lián)，分步加入交聯(lián)劑和調(diào)節(jié)攪拌速度等控制手段，有效地解決了上述問題。
第四、葡聚糖凝膠分離的目的
葡聚糖凝膠是由直鏈的葡聚糖分子和交聯(lián)劑3—氯1，2—環(huán)氧丙烷交聯(lián)而成的具有多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物。凝膠顆粒中網(wǎng)孔的大小可通過調(diào)節(jié)葡聚糖和交聯(lián)劑的比例來控制，交聯(lián)度越大，網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)越緊密；交聯(lián)度越小，網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)就越疏松，網(wǎng)孔的大小決定了被分離物質(zhì)能夠自由出入凝膠內(nèi)部的分子量范圍?？煞蛛x的分子量范圍從幾百到幾十萬不等。
葡聚糖凝膠層析，是使待分離物質(zhì)通過葡聚糖凝膠層析柱，各個組分由于分子量不相同，在凝膠柱上受到的阻滯作用不同，而在層析柱中以不同的速度移動。分子量大于允許進入凝膠網(wǎng)孔范圍的物質(zhì)*被凝膠排阻，不能進入凝膠顆粒內(nèi)部，阻滯作用小，隨著溶劑在凝膠顆粒之間流動，因此流程短，而先流出層析柱；分子量小的物質(zhì)可*進入凝膠顆粒的網(wǎng)孔內(nèi)，阻滯作用大，流程延長，而zui后從層析柱中流出。若被分離物的分子量介于*排阻和*進入網(wǎng)孔物質(zhì)的分子量之間，則在兩者之間從柱中流出，由此就可以達到分離目的。