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DNA純化可以:(1)獲得高純度的DNA;(2)濃縮DNA;(3)用于測(cè)序、遺傳信息分析等分子生物學(xué)應(yīng)用。
實(shí)驗(yàn)步驟
一、試劑盒組成、貯存、穩(wěn)定性
1. 說(shuō)明書(shū),耗材:96孔DNA制備板,96孔1.6 ml深孔板,96孔V型底板。
2. Buffer PCR-A:DNA結(jié)合溶液。室溫密閉貯存。若出現(xiàn)沉淀,應(yīng)于65°C溫浴溶解并冷卻至室溫后再使用。
3. Buffer W2 concentrate:去鹽液。使用前,根據(jù)瓶上的體積加入乙醇,混合均勻,室溫密閉貯存??捎?乙醇或95%無(wú)水乙醇。
4. Eluent:2.5 mM Tris-HCl,pH 8.5。室溫密閉貯存。
二、操作步驟
用戶可以選擇負(fù)壓法或離心法。
A. 負(fù)壓法
1A. 正確連接負(fù)壓裝置,將96孔DNA制備板置于負(fù)壓裝置上;在PCR、酶切、酶標(biāo)或測(cè)序反應(yīng)液中,加3個(gè)體積的Buffer PCR-A(若Buffer PCR-A不足100 μl,加至100 μl);混合均勻后轉(zhuǎn)移到96孔DNA制備板中,開(kāi)啟并調(diào)節(jié)負(fù)壓至-25-30英寸汞柱,緩慢吸掉板中溶液。
2A. 加0.3 ml Buffer W2,吸盡管中溶液。以同樣的方法再用0.3 ml Buffer W2洗滌兩次。
* 確認(rèn)在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上的體積加入無(wú)水乙醇。
3A. 保持負(fù)壓將96孔DNA制備板抽吸10 min。
4A. 導(dǎo)流管朝下將96孔DNA制備板于長(zhǎng)纖維性紙巾上用力拍擊6次。
. 將96孔DNA制備板置于96孔V型底板上,在膜正*加25-30 μl水或Eluent,室溫靜置1 min。≥3 000×g離心5 min洗脫DNA。
B. 離心法
1B. 在PCR、酶切、酶標(biāo)或測(cè)序反應(yīng)液中,加3個(gè)體積的Buffer PCR-A(若Buffer PCR-A不足100 μl,加至100 μl);混勻后,轉(zhuǎn)移到96孔DNA制備板中,將96孔DNA制備板置于96孔1.6 ml深孔板中,1 000×g離心1 min,棄濾液。
2B. 在96孔DNA制備板中,加0.3 ml Buffer W2,1 000×g離心1 min,棄濾液。以同樣的方法再用0.3 ml Buffer W2洗滌一次。
* 確認(rèn)在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上的體積加入無(wú)水乙醇。
3B. 將96孔DNA制備板置于96孔1.6ml深孔板中,≥3 000×g離心10 min。
4B. 將96孔DNA制備板置于潔凈的96孔V型底板中,在膜正*加25-30 μl水或Eluent,室溫靜置1 min。≥3 000×g離心5 min洗脫DNA。
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