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技術(shù)文章
鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)方法
點(diǎn)擊次數(shù)：509 發(fā)布時(shí)間：2012-11-12
鼠肝細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)方法
一、實(shí)驗(yàn)材料：
6-8周齡大小鼠；剪刀，鑷子，灌流用針頭，連接管，玻璃平皿，細(xì)胞篩，冰盒
二、實(shí)驗(yàn)方法：
1.培養(yǎng)用液
洗滌培養(yǎng)基：DMEM
基礎(chǔ)培養(yǎng)基：DMEM/F12
2.消化用液
前灌流液T1 ;后灌流液T2
3.培養(yǎng)基本操作方法
a.將小/大鼠進(jìn)行麻醉，待其進(jìn)入深度麻醉狀態(tài)后迅速將其固定于解剖板上，于超凈臺(tái)中解剖，暴露肝臟；
b.沿肝門*固定，灌流前灌流液T1（37℃下預(yù)熱），流速5ml/min，待肝臟膨脹后迅速剪斷下腔靜脈, 灌流15min；
c.前灌流液灌流完后，立即灌流后灌流液T2（37℃下預(yù)熱），流速3ml/min，5-10min；
d.取下肝臟，置于平皿中，冰上剪碎肝組織，200目濾網(wǎng)過濾；用基礎(chǔ)培養(yǎng)基清洗網(wǎng)上組織；
e.收集濾液，600rpm 離心2min；重復(fù)一次；
f.棄上清，往沉淀中加2ml*培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞后，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)，將細(xì)胞接種至鼠尾膠原包被的25cm2培養(yǎng)瓶中，37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察。