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技術(shù)文章

293-T細胞培養(yǎng)

點擊次數(shù):1990 發(fā)布時間:2012-6-14

 293-T細胞培養(yǎng) 

 293-T細胞培養(yǎng) 應(yīng)注意以下幾個方面:
 
1.用1640加10%胎牛血清,有的種系用DMEM.血清要求質(zhì)量較高,在普通血清中細胞生長不太好。1640用雙蒸水溶解,按說明加入*。
 
2.培養(yǎng)液中應(yīng)加入HEPES,起緩沖pH值的作用,否則會影響細胞狀態(tài)。如果用20%的HEPES,每次配培養(yǎng)液時每200ml培養(yǎng)液可加入5ml.加入HEPES后1640培養(yǎng)液顏色略呈橘黃色而非暗紅色。
 
3.消化所用*可選擇0.125%濃度,且不要消化時間太長。也有研究者認為不用*,直接吹打使細胞脫壁,但使用*效果較好。消化時在鏡下觀察到細胞形態(tài)稍有變化即可,不要等形態(tài)明顯變化后再停止??梢圆挥眉友褰K止消化,只要將*倒出來,加上培養(yǎng)液吹打即可。
 
4.傳代密度不宜過高也不易過低,一般1瓶傳3瓶可能比較合適。
 
5.培養(yǎng)液應(yīng)該適當偏酸性,在7.0-7.2之間比較好。一般加上HEPES后,pH值是不用調(diào)的。
 
6.細胞代數(shù)越高生長越快,同時性狀和原代差別也更大。一般2-3天傳代一次比較合適。
 
7.傳代時細胞密度在80%左右比較好,如果超過90%融合再傳會影響細胞狀態(tài)。

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