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技術(shù)文章

可溶性粘附分子檢測

點(diǎn)擊次數(shù):450 發(fā)布時(shí)間:2012-11-1

  目前對于血清中可溶性粘附分子的檢測多采用ELISA試劑盒,5種可溶性粘附分子在正常人血漿中濃度的變化范圍及某些疾病狀態(tài)下的變化。不同來源的試劑盒由采用抗體特異性和親和力的差別、以及標(biāo)準(zhǔn)品不同,所得出的正常值范圍有較大差異,因此有必要對這種檢測手段加以標(biāo)準(zhǔn)化。值得注意的采用這種方法檢測得到的濃度值未必能夠準(zhǔn)確反映可溶性粘附分子的實(shí)際水平,因?yàn)榭扇苄哉掣椒肿映杂坞x狀態(tài)存在外,還可以與細(xì)胞表面游離的配體結(jié)合,用常規(guī)的ELISA法無法檢測結(jié)合狀態(tài)的可溶性粘附分子。此外,對所測得的可溶性粘附分子水平應(yīng)從粘附分子產(chǎn)生和清除兩方面進(jìn)行分析,產(chǎn)生的增加和清除的減少都可造成可溶性粘附分子血中水平的升高,是兩個(gè)不同原因所導(dǎo)致的相同結(jié)果。
  
  可溶性粘附分子elisa試劑盒,種屬齊全,檢測程序?yàn)椋?br />  
  在使用前,將所有試劑和樣品室溫。再次離心樣品解凍后測定前。據(jù)建議,所有樣品和標(biāo)準(zhǔn)來測定一式兩份。
  
  1。準(zhǔn)備好所有試劑,工作標(biāo)準(zhǔn)和樣品在前面的章節(jié)中。
  
  2。請確定井?dāng)?shù)的使用,并把任何剩余的井和入袋干燥劑,密封保鮮袋,將未使用的井在4°C的含量布局表
  
  。每孔加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)和樣品。封面用膠粘帶提供。孵育2小時(shí),在37℃下一盤布局記錄標(biāo)準(zhǔn)和樣品檢測。
  
  4。每孔中取出的液體,不洗。
  
  5。向每孔中加入100μl*抗體(1倍)。蓋上一個(gè)新的膠粘帶。孵育1小時(shí),在37℃下(*抗體(1X)可能會(huì)出現(xiàn)混濁。預(yù)熱至室溫,輕輕混勻,直到出現(xiàn)均勻解決方案。)
  
  6。吸液的各孔和洗滌,共洗滌三次重復(fù)該過程兩次。洗凈,每孔填充洗滌緩沖液(200μL)使用噴瓶,多道移液器,歧管器,或autowasher,和,靜置2分鐘,*清除液體的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗滌后,清除任何剩余洗滌緩沖液的吸ordecanting。倒置板和涂抹對干凈的紙巾。
  
  7。向每孔中加入100μl的HRP-抗*蛋白(1×)。量的微量滴定板,用一個(gè)新的粘接劑條。溫育1小時(shí),在37℃下
  
  8。重復(fù)的愿望/洗滌過??程中,在步驟6的5倍。
  
  9。將90μlTMB底物添加到每個(gè)孔中。孵育15-30分鐘,在37℃下避光
  
  10。一站式解決方案,每孔加入底物,輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板,以確保充分混合。
  
  11。在5分鐘內(nèi),設(shè)置至450nm,使用酶標(biāo)儀測定各孔的光密度。如果波長校正,設(shè)置為540nm或570nm處。在540nm或570nm波長在450nm處的讀數(shù)減去讀數(shù)。該減法校正板的光學(xué)缺陷。在450nm處未經(jīng)修正讀數(shù)直接,可能會(huì)比較高,不太準(zhǔn)確。
  
  

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