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雞神經(jīng)纖毛蛋白1（NRP1）ELISA試劑盒相關(guān)信息
點擊次數(shù)：460 發(fā)布時間：2012-8-26
| 產(chǎn)品類型 | 產(chǎn)品名稱 | 別名 | 代碼 | 大小 | 種類 | 目標(biāo)名稱 | 縮寫 | 蛋白質(zhì)生物過程 | 樣品類型 | 檢測時間 | 樣品體積 | 檢測wavelengt |
| ELISA試劑盒 | 雞神經(jīng)纖毛蛋白1（NRP1）ELISA試劑盒 | RP11-342D11.1，BDCA4，CD304，DKFZp686A03134，DKFZp781F1414，NP1，NRP，VEGF165R，OTTHUMP00000020818 |神經(jīng)纖毛-1跨膜受體 | CSB-EL016091CH | 96T | 雞 | 神經(jīng)纖毛蛋白1 | 血管生成 | 血清，血漿 | 1-5H | 50-100ul | 450 nm處 |
原理
此法采用定量夾心酶聯(lián)免疫技術(shù)?？贵w具體為NRP1已經(jīng)被預(yù)先涂到微孔板。標(biāo)準(zhǔn)和樣品吸入井和任何的NRP1目前的固定化抗體的約束。*共軛的抗體特異性NRP1除去任何未結(jié)合的物質(zhì)后，加入到孔中?？?蛋白共軛的辣根過氧化物酶（HRP）的洗滌后，加入到孔中。經(jīng)過洗滌，以除去任何未結(jié)合的抗*蛋白的酶試劑，底物溶液加入到孔中，并顏色發(fā)展成比例的量的初始步驟中NRP1綁定。彩色顯影被停止并測量的顏色的強度。
精度
批內(nèi)精密度（內(nèi)檢測精度）：CV％<8％
三種已知濃度的樣品進(jìn)行了測試20次在一個平板上進(jìn)行評估。
間精密度（精密檢測間）：CV％<10％
已知的三個樣本20檢測到的濃度進(jìn)行了測試評估。
樣品采集和存儲
血清：使用血清分離管（SST）和全血標(biāo)本在室溫下兩小時或4℃過夜℃，然后離心15分鐘，在1000×g下。刪除上清即可檢測，或分裝和店內(nèi)樣品在-20°C或-80°C。但應(yīng)避免反復(fù)凍融循環(huán)。
等離子：采集血漿中EDTA或肝素作為抗凝血劑。在2-8°C在30分鐘內(nèi)收集離心15分鐘，1000×G。即可檢測，或分裝保存樣本在-20°C或-80°C。但應(yīng)避免反復(fù)凍融循環(huán)。
檢測程序
在使用前，將所有試劑和樣品室溫。再次離心樣品解凍后測定前。據(jù)建議，所有樣品和標(biāo)準(zhǔn)來測定一式兩份。
1。準(zhǔn)備好所有試劑，工作標(biāo)準(zhǔn)和樣品在前面的章節(jié)中。
2。請確定井?dāng)?shù)的使用，并把任何剩余的井和入袋干燥劑，密封保鮮袋，將未使用的井在4°C的含量布局表
。每孔加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)和樣品。封面用膠粘帶提供。孵育2小時，在37℃下一盤布局記錄標(biāo)準(zhǔn)和樣品檢測。
4。每孔中取出的液體，不洗。
5。向每孔中加入100μl*抗體（1倍）。蓋上一個新的膠粘帶。孵育1小時，在37℃下（*抗體（1X）可能會出現(xiàn)混濁。預(yù)熱至室溫，輕輕混勻，直到出現(xiàn)均勻解決方案。）
6。吸液的各孔和洗滌，共洗滌三次重復(fù)該過程兩次。洗凈，每孔填充洗滌緩沖液（200μL）使用噴瓶，多道移液器，歧管器，或autowasher，和，靜置2分鐘，*清除液體的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗滌后，清除任何剩余洗滌緩沖液的吸ordecanting。倒置板和涂抹對干凈的紙巾。
7。向每孔中加入100μl的HRP-抗*蛋白（1×）。量的微量滴定板，用一個新的粘接劑條。溫育1小時，在37℃下
8。重復(fù)的愿望/洗滌過??程中，在步驟6的5倍。
9。將90μlTMB底物添加到每個孔中。孵育15-30分鐘，在37℃下避光
10。一站式解決方案，每孔加入底物，輕輕晃動酶標(biāo)板，以確保充分混合。
11。在5分鐘內(nèi)，設(shè)置至450nm，使用酶標(biāo)儀測定各孔的光密度。如果波長校正，設(shè)置為540nm或570nm處。在540nm或570nm波長在450nm處的讀數(shù)減去讀數(shù)。該減法校正板的光學(xué)缺陷。在450nm處未經(jīng)修正讀數(shù)直接，可能會比較高，不太準(zhǔn)確。
計算結(jié)果
建議使用專業(yè)的軟“曲線專家1.3”的標(biāo)準(zhǔn)曲線，這可以從我們的下載。
平均每個標(biāo)準(zhǔn)和樣品的重復(fù)讀數(shù)和平均減去零標(biāo)準(zhǔn)的光學(xué)密度。
標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過減少使用能產(chǎn)生四參數(shù)邏輯（4-PL）的曲線擬合的計算機軟件的數(shù)據(jù)。作為一種替代方法，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，對在y-軸的濃度通過繪制在x-軸為每個標(biāo)準(zhǔn)的平均吸光度，并繪制一個通過在曲線圖上的點的*擬合曲線。該數(shù)據(jù)可以通過繪制與日志的OD值和*擬合直線的NRP1濃度的日志，可以通過回歸分析確定線性化。此過程會產(chǎn)生足夠的，但不太的適合的數(shù)據(jù)。
如果已稀釋的樣品，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出的濃度必須乘以稀釋因子。
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