細(xì)胞常見問題                                                 

1.血清中可能出現(xiàn)的沉淀物是什么？

基于多年的實(shí)驗(yàn)研究，用于細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛血清以及其它血清中可能會存在以下種類的沉淀物：：（1）纖維蛋白，它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物，可以達(dá)到1-2mm，可以用肉眼觀察到。因?yàn)檠宥际窃诘蜏叵逻M(jìn)行收集和快速處理的，一些纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體）在處理過程中仍然處于溶解狀態(tài)，當(dāng)經(jīng)過zui后的過濾分裝后，就會在瓶中凝結(jié)出現(xiàn)纖維蛋白沉淀。（2）磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會使血清出現(xiàn)渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn)，這些小黑點(diǎn)由于布朗運(yùn)動看上去可以活動，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。（3）*、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)。他們也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見原因。

2.血清中的沉淀物對細(xì)胞培養(yǎng)有什么影響？

（1）細(xì)胞生長，我們的試驗(yàn)以及經(jīng)驗(yàn)表明沉淀物不會影響細(xì)胞培養(yǎng)，我們的客戶以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點(diǎn)。（2）過濾，如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物，血清將很難過濾。一般說來，因?yàn)樵谘迳a(chǎn)時zui后已經(jīng)經(jīng)過100nm或者40nm的過濾處理，并且經(jīng)過了嚴(yán)格的無菌檢測，因此不*再過濾用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清。在實(shí)驗(yàn)室中沒有必要再過濾處理血清，在大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)中往往將血清直接加到培養(yǎng)基中一起過濾。（3）污染，磷酸鈣往往被誤認(rèn)為微生物污染而引起爭端。研究者可能會在血清中觀察到一些絮狀的沉淀，因此就會比較警覺的去做無菌試驗(yàn)，將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)幾天，結(jié)果可能會觀察到更多的絮狀沉淀，因此就斷定血清被污染了。并且當(dāng)研究者將血清樣品放在倒置顯微鏡下觀察時往往可以看到一些可以運(yùn)動的小黑點(diǎn)，因此就更加確認(rèn)是血清被污染了。于是，研究者就會花費(fèi)更多的時間和精力來和生產(chǎn)商確認(rèn)，但zui終確定血清沒有被污染而只是沉淀。為了避免這些問題的發(fā)生，我們建議不要直接將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察是否有菌，而是將血清加到瓊脂板上進(jìn)行培養(yǎng)以觀察是否有細(xì)菌生長。另外，也可以進(jìn)行革蘭氏染色，在油鏡下觀察，以確認(rèn)是否有污染。

3.如何避免血清中沉淀物的出現(xiàn)？

首先要注意正確的血清解凍步驟，而且溶解過程中一定要每隔一段時間均勻而緩慢的搖動血清。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應(yīng)該盡量避免：（1）熱滅活血清；（2）在37℃下培養(yǎng)血清；（3）反復(fù)凍融；（4）γ射線照射；（5）*儲存在2-8℃；（6）在室溫下放置時間過長

4.如何去除血清中的沉淀？

如想去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝到無菌離心管中，以400g離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)檫@可能阻塞濾膜。

5.冷凍管應(yīng)如何解凍？

取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。

6.細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時，是否應(yīng)馬上去除DMSO？

除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附之問題。

7.一般客戶拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么？

客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。

收到細(xì)胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。

細(xì)胞消化液建議使用PBS配制，慎用Hanks液配制。

8.怎么樣確定細(xì)胞的質(zhì)量保障問題，能否開證明？能開什么樣的證明？如果細(xì)胞出現(xiàn)問題，客戶投訴，要求再發(fā)一株細(xì)胞，價格怎么算？

收到細(xì)胞48小時內(nèi)，細(xì)胞出現(xiàn)活力狀態(tài)問題（細(xì)胞活力狀態(tài)用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力），我們受理投訴；超過48小時不超過一星期，我們收取*次細(xì)胞全款的5折后，重新發(fā)放細(xì)胞。

9.快遞細(xì)胞多久能到，是寄凍存的細(xì)胞還是復(fù)蘇好的細(xì)胞？

我們采用快遞發(fā)貨，一般外地2--3天，寄細(xì)胞前請確認(rèn)當(dāng)?shù)販囟?，如果氣溫低?度的，則采用郵寄凍存細(xì)胞。

10.細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；

（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

（3）非*細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

（5）細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

（7）視具體情況而定。

請南京森貝伽生物科技有限公司，專業(yè)的，放心的服務(wù)。