大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）ELISA試劑盒（elisa kit）
中文簡(jiǎn)稱:大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶ELISA試劑盒 英文簡(jiǎn)稱: （AMPK）EELISA KIT
ELISA簡(jiǎn)介 內(nèi)容目錄導(dǎo)航：ELISA簡(jiǎn)介 ELISA試劑組成 ELISA測(cè)定步驟 ELISA試劑展示
大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）ELISA試劑盒（elisa kit）敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷試劑盒。且擁有試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等特點(diǎn)。使用方法一：96T ELISA試劑盒（標(biāo)本90個(gè)，標(biāo)準(zhǔn)曲線6個(gè)|標(biāo)本94個(gè)，標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照2個(gè)）。 使用方法二：48T ELISA試劑盒（標(biāo)本42個(gè)，標(biāo)準(zhǔn)曲線6個(gè)|標(biāo)本47個(gè)，標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照1個(gè)）。ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。ELISA常用方法：雙抗體夾心法測(cè)定。規(guī)格：96T/48T。試劑盒性能：1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%。保存條件及有效期：試劑盒保存：2-8℃，有效期：6個(gè)月。
ELISA實(shí)驗(yàn)中zui可能出現(xiàn)問(wèn)題
一、 所有孔未顯色 1、分析原因： 1） 微孔加入抗體后，洗板不*，微孔中存在游離的抗體。 2） 用錯(cuò)試劑。 3） 在操作中忘記加酶或抗體。 2、解決辦法： 1） 檢查洗板器械，比如洗板機(jī)管道是否堵塞、洗液是否用完。 2） 在加樣前，要看清瓶簽。 3） 嚴(yán)格按說(shuō)明書操作步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，確保每步都到位。 二、 所有孔顯色偏低 1、分析原因： 1） 微孔加入抗體后，洗板不*，微孔中存在游離的抗體。 2） 洗板不干凈。 3） 抗體污染了酶結(jié)合物等其它試劑。 4） 溫度沒達(dá)到要求。 5） 每孔加入的試劑量低于說(shuō)明書要求量。 2、解決辦法： 1） 手工加蒸餾水洗板時(shí)，要避免吸頭接觸微孔，常更換新的蒸餾水。 2） 洗板時(shí)要確保每孔都注滿蒸餾水（約400ul），且至少洗板五次。 3） 嚴(yán)格按說(shuō)明書要求操作，每次取樣要更換吸頭。 4） 控制孵育溫度在25℃。 5） 加樣器吸頭安放牢固避免吸樣不足，加樣時(shí)務(wù)必將吸頭內(nèi)液體打盡。
ELISA測(cè)定步驟
大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）ELISA試劑盒（elisa kit）測(cè)定時(shí)一般需經(jīng)過(guò)以下步驟：固相包被→加待測(cè)樣品→溫育→洗滌+加酶標(biāo)物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結(jié)果。ELISA操作較繁雜，操作不當(dāng)將引起較大的誤差。在操作中應(yīng)注意以下5個(gè)方面。
1．隨著病情的進(jìn)展或由其他因素影響，某些抗體在機(jī)體內(nèi)的含量發(fā)生大幅波動(dòng)，因此有必要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理，例如對(duì)血清標(biāo)本作適當(dāng)稀釋，或離心分離血脂等。間接法測(cè)定中，標(biāo)本適當(dāng)稀釋還可降低非特異性反應(yīng)。
2．加樣一般使用加液器，在ELISA中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加終止液。加標(biāo)本時(shí)必須每份標(biāo)本使用一支移液器吸嘴，以免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和終止液時(shí)則不需更換吸嘴。
3．在成批手工檢測(cè)中，還應(yīng)注意操作時(shí)差的影響。加樣及混勻時(shí)間的差異，使抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng)時(shí)間不*，對(duì)競(jìng)爭(zhēng)法及定量檢測(cè)影響很大，不注意可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果或定量不準(zhǔn)。
4．洗滌是ELISA操作過(guò)程中決定實(shí)驗(yàn)成敗的一個(gè)關(guān)鍵步驟。目的是除去未結(jié)合的免疫反應(yīng)物，終止抗原抗體反應(yīng)，除去標(biāo)本中與反應(yīng)無(wú)關(guān)的成分、游離的酶標(biāo)物以及反應(yīng)過(guò)程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)?？捎孟窗鍣C(jī)洗板或手工洗板，前者洗滌質(zhì)量較好，各反應(yīng)孔洗滌效果均一，批內(nèi)、批間差異小，手工洗板應(yīng)注意控制各孔洗滌效果，差異不宜太大。
5．準(zhǔn)確判定結(jié)果須使用ELISA測(cè)讀儀（酶標(biāo)儀），比色法判讀可選擇單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)，根據(jù)反應(yīng)液顏色的不同選用不同波長(zhǎng)的濾光片，以空白孔校零測(cè)定反應(yīng)孔的吸光度值（A值）。酶標(biāo)儀具有良好的重復(fù)性。
ELISA試劑展示
大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）ELISA試劑盒（elisa kit）
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