乙醛脫氫酶(ALDH)測定步驟:
、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至600nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
()試劑四于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)孵育5min。
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入0μL樣本、200μL試劑四和40μL試劑五,混勻,記錄600nm處20s時(shí)吸光值A(chǔ)和min20s后的吸光值A(chǔ)2,計(jì)算ΔA=A-A2。
NOX 活力單位的計(jì)算
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
、血清(漿)NOX活力的計(jì)算:
單位的定義:每mL血清(漿)在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.0定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/mL)=ΔA×V反總÷V樣÷0.0÷T=2500×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NOX活力的計(jì)算:
()按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.0定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.0÷T=2500×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.0定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/g鮮重)=ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷0.0÷T=505×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.0定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/04cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.0÷T=.0×ΔA
V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.25mL;V樣:加入樣本體積,0.0mL;V樣總:加入提取液體積,0.202mL;T:反應(yīng)時(shí)間,min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬。