飼料中鹽酸氨丙琳的測定液相色譜法
GB/T 8381.11-2005
范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了以液相色譜法測定飼料中鹽酸氨丙琳的方法，適用于配合飼料、濃縮飼料、添加劑預(yù)混合飼料和精料補充料中鹽酸氨丙琳的測定，zui低檢測濃度為1.0 m g/kg.
原理
飼料樣品中的鹽酸氨丙琳以含有離子對試劑的甲醇溶液超聲提取，離心后過濾，用離子對反相液相色譜法測定。
試荊和材料
除特殊注明外，本法所用的試劑均為分析純，水為蒸餾水，色譜用水符合GB/T 6682一級水的規(guī)定。
4.1 乙睛:色譜純。
4.2 甲醇。
4.3 十二烷基磺酸鈉。
4.4 二乙胺。
4.5 冰乙酸。
4.6 提取液:稱取1. 36 g十二烷基磺酸鈉（4.3）,溶于適量2+1（V1+V2）的甲醇水溶液中，并用該混合液稀釋至1 L.
4.7 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)品:純度99.8%.
4.8 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)溶液
4.8. 1 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)儲備液:準(zhǔn)確稱取鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)品（4. 7）0.0500g，置于100mL容量瓶中，用提取液（4. 6）溶解并定容至刻度，搖勻，其濃度為500ug/mL,貯于4--6℃冰箱中，有效期一個月。
4.8.2 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)工作液:準(zhǔn)確吸取鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)儲備液（4.8.1）10.00 mL，置于50 mL容量瓶中，用提取液（4.6）溶解并定容至刻度，搖勻，其濃度為100 ug/mL。再以此稀釋液配置50 ug/mL,10 ug/mL,5 ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。
4.9 HPLC流動相:稱取1.09g 十二烷基磺酸鈉（4.3 ），溶于適量體積分?jǐn)?shù)為30%的乙睛水溶液中，加入3 mL二乙胺（4.4）和10 mL冰乙酸（4.5），用體積分?jǐn)?shù)為30%的乙睛水溶液稀釋至I L混勻，用0.45mm濾膜過濾，使用前超聲脫氣。
5 儀器
分析天平:感量為0.0001g 和0.001g ，各一臺。
超聲水浴。
離心機:4000r/min-5000r/min,
GE-200液相色譜儀具有GE-200紫外檢測器或二極管陣列檢測器。:
6 試樣制備
按GB/T 14699.1采取有代表性的樣品200g -500g ，用四分法縮至100g ，粉碎，使全部通過0.45mm孔徑的篩，充分混勻，貯于磨口瓶中備用。
分析步驟
7.1 提取
稱取飼料樣品5g（準(zhǔn)確至0.0 01g ），置于50m L離心管中，準(zhǔn)確加人提取液（4.6）50.00m L，加塞，充分搖動1min，再置超聲水浴中超聲提取20min，其間用手充分搖動兩次。取出后于離心機上4000r/min離心10min，將上清液用0.45um濾膜過濾，濾液作為試樣溶液。
7.2 測定
7.2 .1 HPLC測定參數(shù)的設(shè)定
色譜柱:C18柱，柱長150mm，柱內(nèi)徑4.6mm,粒度5um，Vertex C18分析柱。
柱溫 : 室溫。
檢測器 :紫外檢測器，檢測波長267nm,
流動相流速:1.5m L/min
進樣量 : 10ul-20ul。
7.2.2 定f測定
取 適 量 由7.1獲得的試樣溶液和相應(yīng)濃度的鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)工作液（4.8.2）進行測定，以色譜峰峰
面積做單點校準(zhǔn)定量。
結(jié)果計算與表述
分析結(jié)果表示為鹽酸氨丙琳在飼料中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X，以毫克每千克（mg/kg）表示，用式（1）計算:X=P2*V1*c*V2/P1*m*V3……………………（1）
式中:
V1— 加人提取液的體積，單位為毫升（mL） ;
V2 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)溶液的進樣體積，單位為微升（uL）;
V3— 試樣溶液的進樣體積，單位為微升（uL） ;
P1 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)的色譜峰面積響應(yīng)值;
P2— 試樣溶液對應(yīng)的色譜峰面積響應(yīng)值;
c— 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，單位為微克每毫升（ug/mL）;
m— 試樣質(zhì)量，單位為克（g）。
平行測定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留至小數(shù)點后1位。
9 重復(fù)性
在同一實驗室，由同一操作人員使用同一臺儀器完成的兩個平行測定的相對偏差不大于7%
本標(biāo)準(zhǔn)是在查閱了大量國內(nèi)外文獻的基礎(chǔ)上，根據(jù)我國的技術(shù)發(fā)展水平研究制定的。
本標(biāo)準(zhǔn)由*提出。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:國家飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心（北京）。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:林東下、趙根龍、高生、李蘭、魏秀蓮、范理、蘇曉鷗、靳松。
